目的：　　研究鼻咽癌细胞株经紫草素(shikonin)药物处理后，检测其细胞增殖抑制率的变化情况，观察鼻咽癌细胞凋亡现象，以及测算细胞凋亡率与Bcl-2、Bax基因mRNA表达量的变化情况，探讨紫草素对鼻咽癌细胞增殖、凋亡以及Bcl-2、Bax基因表达的影响。　　方法：　　1、细胞培养与药物处理　　选择高分化鼻咽癌细胞CNE-1、低分化鼻咽癌细胞CNE-2和非癌性人永生化鼻咽上皮细胞NP-69进行细胞培养。待细胞生长稳定后在培养液中加入紫草素。本实验过程包括对照组（0μg/ml紫草素）和实验组（1μg/ml、5μg/ml、10μg/ml紫草素）。　　2、应用Cell Counting Kit-8（CCK-8）方法检测紫草素对鼻咽癌细胞增殖的影响情况　　取对数生长期细胞接种于96孔培养板，在不同浓度紫草素作用后，采用CCK-8试剂盒检测各鼻咽癌细胞在各时间点处的细胞增殖抑制率变化情况。　　3、Hoechst33258荧光染色观察紫草素处理后的细胞核形态学改变　　取对数生长期细胞接种于6孔培养板中，在荧光显微镜下利用Hoechst33258荧光染液观察紫草素处理后细胞的凋亡现象。　　4、通过流式细胞仪检测各细胞株经紫草素处理后的细胞凋亡率变化　　按照AnnexinⅤ—FITC/PI试剂盒说明收集细胞，利用流式细胞仪检测分析各鼻咽癌细胞株经紫草素处理后的细胞凋亡率变化情况。　　5、采用实时荧光定量PCR(quantitative real time fluorescence polymerase chainreaction，Q-RT-PCR)检测细胞Bcl-2、Bax mRNA的表达量　　提取细胞总RNA，利用Q-RT-PCR检测分析紫草素处理前后的细胞Bcl-2、BaxmRNA表达量的变化。　　6、统计学分析　　应用SPSS17软件分析各组数据，检验水准为α=0.05，进行分析的计量资料用均数±标准差((x)±s)来表示，采用t检验分析，P＜0.05为差异具有统计学意义。　　结果：　　1、紫草素对CNE-1、CNE-2和NP-69细胞增殖抑制的影响　　以无药物处理组细胞的相对增殖抑制率为零。1μg/ml、5μg/ml、10μg/ml紫草素处理CNE-1细胞24 h抑制率分别为6.4％±0.1％、18.2％±0.2％、33.3％±0.3％，48 h抑制率分别为22.3％±0.2％、58.5％±0.8％、83.3％±1.2％，72h抑制率分别为45.8％±0.7％、84.7％±1.4％、91.7％±2.1％;1μg/ml、5μg/ml、10μg/ml紫草素处理CNE-2细胞24 h抑制率分别为9.3％±0.1％、13.5％±0.2％、27.9％±0.4％，48 h抑制率分别为20.3％±0.2％、41.3％±0.5％、76.6％±1.1％，72 h后的抑制率分别为56.7％±0.9％、85.4％±1.5％、93.2％±2.3％。CNE-1、CNE-2的各实验组细胞增殖抑制率与对照组相比，差别均有统计学意义（P＜0.05或0.01），且随着紫草素浓度的增加和作用时间的延长，细胞增殖抑制率也随之增加。1μg/ml紫草素作用NP-69细胞24h、48h、72h后的抑制率分别为0.4％±0.02％、0.5％±0.04％、0.6％±0.05％，5μg/ml紫草素作用NP-69细胞24h、48h、72h后的抑制率分别为0.3％±0.01％、0.5％±0.03％、0.6％±0.04％，这两个浓度实验组细胞增殖抑制率与对照组相比，差别均无统计学意义(P＞0.05）;而10μg/ml紫草素作用NP-69细胞24h、48h、72h后的抑制率分别为2.6％±0.1％、4.9％±0.6％、7.9％±0.8％，此浓度实验组细胞增殖抑制率与对照组相比，差别有统计学意义(P＜0.05)，且抑制率随着紫草素作用时间的延长而增高（P＜0.05）。　　2、利用荧光显微镜观察紫草素处理后的细胞凋亡现象　　经Hoechst33258染色的CNE-1、CNE-2对照组细胞核染色质密度较均匀，紫外光下呈淡蓝色荧光;1μg/ml、5μg/ml、10μg/ml紫草素处理24h后细胞数减少，表现为亮蓝色的核固缩和核碎裂呈分叶状。NP-69细胞经同样染色后，未加药处理组细胞核染色质被染成密度分布均匀的浅蓝色荧光;1μg/ml、5μg/ml、10μg/ml紫草素处理24h后细胞基本上未出现明显的凋亡细胞特征。　　3、流式细胞仪检测紫草素处理前后鼻咽癌细胞凋亡率的变化　　以无药物处理组为对照组，通过流式细胞仪检测，对照组与实验组(5μg/ml)的细胞凋亡率CNE-1分别为1.9％±0.1％、5.6％±0.7％，CNE-2分别为2.3％±0.2％、15.3％±0.9％，实验组与对照组比较差别有统计学意义（P＜0.05或0.01）。而NP-69的对照组与实验组(5μg/ml)细胞凋亡率分别为0.2％±0.04％、0.3％±0.05％，实验组与对照组相比差别无统计学意义(P＞0.05)。　　4、紫草素处理前后CNE-1、CNE-2和NP-69细胞的Bcl-2、Bax mRNA表达水平　　对照组NP-69细胞的Bcl-2、Bax mRNA的表达水平均按100％计算，对照组CNE-1、CNE-2细胞的Bcl-2 mRNA的表达量分别为131.2％±1.8％、127.5％±1.6％，Bax mRNA的表达量分别为72.6％±0.9％、79.3％±1.0％;实验组（5μg/mD NP-69、CNE-1、CNE-2细胞的Bcl-2 mRNA的表达量分别为102.6％±1.4％、34.7％±0.3％、22.3％±0.2％，Bax mRNA的表达量分别为96.9％±1.1％、167.5％±2.4％和189.7％±3.1％。CNE-1、CNE-2经紫草素处理后与加药处理前相比，Bcl-2 mRNA表达量明显降低(P＜0.01)，Bax mRNA表达量则显著提高(P＜0.01)，而NP-69细胞Bcl-2、Bax mRNA表达量的变化无明显差异(P＞0.05)。在对照组中，两株鼻咽癌细胞Bcl-2 mRNA表达量高于NP-69细胞(P＜0.05)，Bax mRNA表达量则低于NP-69细胞(P＜0.05);而在实验组中，CNE-1、CNE-2细胞的Bcl-2 mRNA表达量低于NP-69细胞(P＜0.05)，Bax mRNA表达量则高于NP-69细胞(P＜0.05)。　　结论：　　1、CCK-8法检测显示，经不同浓度紫草素处理后鼻咽癌细胞CNE-1、CNE-2细胞增殖能力均存在下降趋势，紫草素对CNE-1、CNE-2的细胞增殖抑制率随药物浓度上升而增加，并呈时间依赖性趋势。　　2、不同浓度紫草素作用细胞后，在荧光显微镜下观察鼻咽癌CNE-1、CNE-2细胞出现典型细胞核形态变化:染色质浓缩、边集，核裂碎，呈大小不等、形态不规则的碎片状，并有凋亡小体形成等凋亡细胞特征。表明紫草素能够诱导鼻咽癌CNE-1、CNE-2细胞凋亡。　　3、AnnexinⅤ-FITC/PI双染细胞凋亡检测结果显示，紫草素作用CNE-1、CNE-2后细胞凋亡率增加，且紫草素对CNE-2细胞的促凋亡作用强于CNE-1细胞。表明紫草素对鼻咽癌CNE-1、CNE-2细胞具有促凋亡作用，并与肿瘤细胞分化程度相关。　　4、Q-RT-PCR法检测显示，CNE-1、CNE-2细胞实验组与对照组相比，Bcl-2 mRNA表达减少，Bax mRNA表达增加，则Bcl-2/Bax比例降低。提示Bcl-2和Bax参与了紫草素诱导CNE-1、CNE-2细胞凋亡的过程，紫草素可能通过影响Bcl-2及Bax mRNA两者之间的平衡，导致Bax促凋亡作用占优势，使细胞向凋亡方向发展。