猪繁殖与呼吸综合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS）对养猪业危害巨大,该病的病原是猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV）。PRRSV基因具有高突变性和多样性,是最易突变的RNA病毒之一,这使得现有的商品化疫苗免疫效果很不理想。研究发现,PRRSV在体内外均有巨噬细胞亲嗜性,尤其在肺泡巨噬细胞（PAM）中病毒含量很高。该病毒在临床上常常表现为持续性感染和与其他疾病混合感染等特点,从而造成该疾病在规模化养殖场中难以防控,严重制约了养猪业的经济效益。为了更好的防控该病,不同科研工作者从多个角度致力于PRRSV致病机制的研究并取得了长足的进展。目前为止,PRRSV的致病机制尚不完全清楚,这也是目前PRRS无法有效防控的重要原因之一。主要拱顶蛋白（Major vault protein,MVP）是真核细胞中最大的核糖核蛋白穹窿体的主要组成部分,在巨噬细胞和树突状细胞中含量很高。据报道,MVP可能是一种新型的病毒诱导的宿主因子,在病毒感染方面发挥一定作用。研究发现,MVP的功能与耐药性、核质运输、细胞信号通路、免疫等有关。近几年,有研究发现,MVP在病毒感染方面也发挥一定作用。并且,有研究表明,MVP可以抑制HCV和HBV的复制及其蛋白质合成,过表达MVP能够抑制VSV、IAV和EV71的复制及合成。目前还没有关于MVP在PRRSV感染中作用的研究报道。我们前期研究发现,在PRRSV感染的PAMs中,MVP表达下调。为进一步研究MVP在PRRSV感染中的作用,本研究采用PRRSV易感细胞CRL2843^CD163细胞系和原代PAM,通过过表达和敲低MVP研究其对PRRSV感染的调控作用,得到如下结果:1. 利用构建的MVP重组腺病毒感染CRL2843^CD163细胞,通过q PCR、Western blot和TCID₅₀分析在CRL2843^CD163细胞中过表达MVP对PRRSV复制的影响。试验结果显示,过表达MVP显著抑制PRRSV在CRL2843^CD163细胞中的复制。2. 设计合成MVP特异性si RNA,转染CRL2843^CD163细胞,敲低细胞内源性MVP表达,探究对PRRSV复制的影响。试验结果显示,敲低MVP表达显著促进PRRSV在CRL2843^CD163细胞中的复制。3. 为了验证MVP抑制PRRSV感染的作用,CRL2843^CD163细胞先转染MVP特异性si RNA,再转染MVP重组腺病毒质粒,然后感染PRRSV,分析MVP对PRRSV复制的作用。试验结果显示,敲低MVP表达能够部分逆转过表达MVP对PRRSV感染CRL2843^CD163细胞的抑制作用。4. 原代PAM转染MVP特异性si RNA,分析敲低MVP表达对PRRSV复制的影响。试验结果显示,敲低MVP后能够显著促进PRRSV在原代PAM中的复制。5. 在CRL2843^CD163细胞中过表达MVP,PRRSV感染后,q PCR检测抗病毒细胞因子m RNA的表达水平。试验结果显示,在PRRSV感染后的CRL2843^CD163中过表达MVP诱导了IFN-α和ISG15 m RNA表达水平的显著升高。在原代PAM中敲低MVP表达,PRRSV感染后,通过检测细胞上清对NDV-GFP在CRL2843细胞中复制的影响,间接测定细胞上清中的干扰素水平。试验结果显示,敲低MVP表达并被PRRSV感染后的PAM细胞上清促进了NDV-GFP在CRL2843细胞中的复制。综上所述,过表达MVP显著抑制PRRSV在CRL2843^CD163细胞中复制,敲低MVP显著促进PRRSV在CRL2843^CD163细胞和PAM中的复制,说明MVP能够发挥显著的抗PRRSV感染作用,并对MVP抗PRRSV感染的作用机制进行了初步的探索,为进一步深入研究MVP在抗PRRSV感染中的作用机制提供了理论和试验基础。