【摘 要】
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熊蜂(Bumblebee)属于最为常见的蜂类昆虫,因其具有摄取植物花蜜和花粉的特点,而被广泛应用于野生植物(濒危植物)和农作物传粉,特别是在温室里的果菜类(例如茄科、豆科等)授粉效果最佳。运用于温室授粉的商业化熊蜂比野生性熊蜂更加容易受到病原物的感染和致病,致病病原有细菌、病毒、外部寄生螨、原生动物(微孢子虫)等,其中凝固酶阴性葡萄球菌(Coagulase-negative Staphylococ
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熊蜂(Bumblebee)属于最为常见的蜂类昆虫,因其具有摄取植物花蜜和花粉的特点,而被广泛应用于野生植物(濒危植物)和农作物传粉,特别是在温室里的果菜类(例如茄科、豆科等)授粉效果最佳。运用于温室授粉的商业化熊蜂比野生性熊蜂更加容易受到病原物的感染和致病,致病病原有细菌、病毒、外部寄生螨、原生动物(微孢子虫)等,其中凝固酶阴性葡萄球菌(Coagulase-negative Staphylococci,CNS)就属于熊蜂的细菌性病原之一。CNS属于人畜共患条件致病菌,可引起人类心内膜炎、败血症和血液感染等疾病;也会引起奶牛的乳腺炎等。CNS还能产生各种致病因子,如脂肪酶,脱氧核糖核酸酶和肠毒素等,对人和动物均会造成一定的损害,常用其保守基因hsp60、gap、sod A、tuf和rpo B等对CNS进行种属的鉴定。本研究从新疆某养蜂场病死熊蜂幼虫无菌采取病料,对其进行了细菌的分离、生化鉴定、16S r RNA鉴定、gap基因生物学分析、溶血性测定、小鼠致病性试验和药物敏感性测定。主要研究工作内容和结果如下:1.熊蜂幼虫缓慢葡萄球菌的分离鉴定:为了分离导致熊蜂幼虫变黄、发黑、死亡的病原,从新疆石河子某养蜂场生病的熊蜂幼虫中无菌采集样本,对其进行细菌分离鉴定、生化鉴定、16s r RNA测序鉴定等研究。结果显示,分离获得1株革兰氏阳性球菌,经生化鉴定及16s r RNA测序初步确定了导致熊蜂幼蜂发病的病原为缓慢葡萄球菌,属于CNS。2.熊蜂幼虫缓慢葡萄球菌gap基因的生物信息学分析:本研究以分离的缓慢葡萄球菌SHZXF1株为材料,对gap基因片段进行扩增、克隆、测序,分析其部分生物信息学特性。结果显示分离株gap基因序列933bp,共编码311个氨基酸;生物信息学分析显示,SHZXF1株与缓慢葡萄球菌(S.lentus)的核苷酸同源性为99.9%,且类聚同一分支;gap蛋白为亲水性蛋白,分子质量为33.59 k Da,理论等电点为4.77;该蛋白无跨膜区,无信号肽,属于非分泌型蛋白。25个潜在的磷酸化位点和1个糖基化位点,其二级结构是混合型,其中无规则卷曲所占比例最高,为37.62%。该结论为gap基因作为保守基因作为检测CNS的有力支撑。3.熊蜂幼虫缓慢葡萄球菌部分生物学特性的研究:为了解新疆石河子某病死的熊蜂幼虫SHZXF1株的耐抗生素和致病性情况。本试验展开了药敏试验和致病性分析。结果显示SHZXF1株对庆大霉素、多西环素、青霉素、头孢唑啉、麦迪霉素、复方新诺明、诺氟沙星、多粘菌素B等21种抗生素均呈高度敏感性;小鼠感染SHZXF1株存活时间为平均4.125天,LD50为106.86CFU。
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