【摘 要】
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基于抗原抗体分子识别的免疫学分析方法因操作简单、检测时间快、检测灵敏度高及特异性好等优势,在临床诊断、环境监测及食品安全检测等领域获得了广泛的关注和研究。免疫分析法是借助抗原抗体的特异性免疫识别测定样品中对应抗原或抗体的浓度,免疫比浊法属于无标记免疫分析。无标记免疫分析无需事先对抗原或抗体进行标记,具有检测步骤少、操作简单、检测时间快、成本较低等优点。但是,现有的无标记免疫分析方法的检测灵敏度不够
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基于抗原抗体分子识别的免疫学分析方法因操作简单、检测时间快、检测灵敏度高及特异性好等优势,在临床诊断、环境监测及食品安全检测等领域获得了广泛的关注和研究。免疫分析法是借助抗原抗体的特异性免疫识别测定样品中对应抗原或抗体的浓度,免疫比浊法属于无标记免疫分析。无标记免疫分析无需事先对抗原或抗体进行标记,具有检测步骤少、操作简单、检测时间快、成本较低等优点。但是,现有的无标记免疫分析方法的检测灵敏度不够高,限制了它的使用范围。本文结合光微流技术提出了一种光微流激光免疫比浊法。光微流激光是近些年兴起的一种新型集成技术。它包含了微流通道,光学微腔和激光增益介质,在生化传感方面有着显著优势。本文实现的光微流激光免疫比浊法不仅保留了传统免疫比浊法操作简单、成本低、检测时间快、均相反应等优势,同时又具有光微流生化传感器检测灵敏度高、检测范围较大、检测样品消耗少、便于集成的优势,在临床诊断,食品安全检测和环境监测等领域有着巨大的潜在应用价值。本文主要做了以下工作:本文首先通过搭建传统免疫比浊法的实验平台,测得试剂盒反应时间曲线,为后文中采用终点法测量,反应时间定在十分钟提供了实验依据。本文提出基于法珀腔荧光增强型免疫比浊法。通过法珀腔增强荧光与抗原抗体复合物之间的作用次数,提高检测的灵敏度。实验中,采用两片反射率分别为99.5%和90.5%的反射镜构成法珀腔。将罗丹明B水溶液与抗原抗体复合物悬浮液混合均匀,在同一泵浦光下测得不同抗原浓度对应的光谱,将光谱强度积分后可得到抗原浓度与荧光强度之间的关系。通过这种方法测得的IgG的浓度范围为1.79×10-4g/L到1.79×10-1g/L。在法珀腔荧光增强型免疫比浊法的基础上,提出了光微流激光免疫比浊法。通过提高泵浦光能量,调整泵浦光入射位置,并优化罗丹明B水溶液的浓度,将法珀腔产生的激光波长调整到600nm左右。再将抗原抗体反应形成的复合物悬浮液与罗丹明B水溶液混合均匀,通入微流通道中。由于复合物加入到谐振腔内,增加了谐振腔内的损耗系数,由于激光的放大作用,这种细微的变化对激光的强度有着巨大的影响。通过这种方法测得的IgG浓度范围为1.79×10-10g/L到1.79×10-5g/L。
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