高油酸低亚麻酸油菜资源的鉴定和选择

来源 :华中农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wanfan001
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油菜种子中油酸、亚麻酸的含量对其食用和工业价值有重要的影响。培育高油酸低亚麻酸油菜品种是油菜育种的重要目标之一。本研究通过反义FAD2转基因和分子标记辅助回交选择的方法,获得了高油酸低亚麻酸的油菜资源,为育种提供了基础材料,同时为多个位点同时导入时的分子标记辅助选择提供了一定的参考数据。  以甘蓝型冬油菜品系甲572(油酸含量66%)为转化受体,使用表达载体pBI121 napin1:antiFAD2,通过农杆菌介导的遗传转化获得了一批反义FAD2的转基因植株。对463份转基因种子进行GC分析,发现转基因家系种子中油酸含量显著高于转化受体材料和对照材料(HUA5,油酸含量65%),平均值达到74.91%,最高达86%的家系。对共19个转基因家系进行southern杂交分析发现:三个单拷贝家系的油酸含量平均为75.18%;而两个以上拷贝家系的含量达到了78.76%,同时随着拷贝数的增加油酸含量没有显著的变化。  以D126为供体亲本,华5和中11作为轮回亲本进行分子标记辅助轮回选择。利用“三步法”即首先进行导入位点的前景选择,然后进行目标位点侧翼连锁位点的选择,最后对入选单株进行全基因组水平的背景选择。前景选择中使用针对三个位点开发的SNP标记,侧翼筛选和全基因组背景筛选中分别使用10个和90个SSR标记。在BC2F1代,共对396个单株进行前景分析,侧翼分析后对18个单株进行了全基因组背景分析,得到回复率最高位85%的单株。用回复率较高的9个单株进行回交得到BC3F1代,对该世代的614个单株进行前景和侧翼标记的分析,并用入选的52个单株进行回交得到BC4F1,自交得到BC3F2。对BC3F2代的1428个单株进行分析,根据前景筛选及侧翼筛选结果对45个单株进行全基因组背景选择,得到回复率最高达94.71%的单株。在BC4F1代的分析中共有780个单株,对前景分析中携带有三个导入位点的78个单株进行了侧翼标记的筛选,根据该结果选出了21个单株进行了全基因组背景选择,得到回复率最高为95.66%的单株。
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