CIDEC互作蛋白的筛选与分析

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猪肉品质是猪的重要经济性状,也是猪的性能测定中的一重要指标。随着人们生活水平的提高,猪的肉质性状也从刚开始一味追求瘦肉率到现在更注重肉质品质。肌内脂肪含量是影响肉质的一个极其重要的指标,肝脏脂肪代谢的能力影响其沉积水平。诱导细胞凋亡FF45样效应因子C(Cell death-inducing DFF45-like effector c, cidec),在鼠中称为脂肪特异性因子(Fat-specific protein of 27kD, FSP27)与脂肪沉积相关,在脂肪代谢中起着重要作用。由于猪CIDEC与小鼠的CIDEC有高度的同源性(82.8%),本研究第一阶段先以小鼠为研究对象,采用RT-PCR, Co-IP,质谱分析等方法,筛选在禁食、高脂对照条件下的肝脏以及对照条件下的脂肪中CIDEC的互作蛋白。获得如下结果:1.在脂肪沉积(高脂喂养)和脂肪动员(禁食处理)这一对相反的进程中,肝脏CIDEC的表达量与甘油三酯(TG)的含量均显著上升,因此推测CIDEC可能是在脂肪沉积和动员中的关键因子。2.利用Co-IP技术捕获CIDEC在高脂,禁食,对照的肝脏和对照的脂肪组织中的互作蛋白。并进行质谱筛选,通过DAVID网站对互作蛋白进行蛋白功能,亚细胞定位,GO, KEGG功能及其富集度等方面的分析。发现在不同营养和不同组织条件下,CIDEC发生转位。本研究第二阶段以巴马猪为实验对象,试图验证CIDEC互作蛋白在猪中是否成立。根据质谱分析的结果,挑选出八个差异显著的互作蛋白并构建表达载体,为下一步采用酵母双杂交方法验证做准备。
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