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肝脏纤维化是肝细胞修复损伤的一种机制,大多数慢性肝病最终都会导致肝脏纤维化。肝脏纤维化是以胞外基质的过量产生和聚集为特征的。有许多细胞,包括成纤维细胞、骨髓来源的前体细胞、肝脏星形细胞以及肝实质细胞都被认为与肝脏纤维化有关,其中活化的肝脏星形细胞产生胞外基质是导致肝脏产生纤维化的最主要因素。尽管我们对肝脏纤维化的发生过程已经有了比较深入的了解,也发现了许多抗纤维化的治疗靶点,并且一些针对这些靶点的药物已用于临床实验,但临床上并无治疗肝脏纤维化的标准程序。因此,开发一种新的治疗方法,以便能在肝脏纤维化发生早期进行及时的干预治疗就变得日益重要。Sorafenib是第一个口服的多激酶抑制剂,能抑制多种存在于细胞内和细胞表面的激酶,其作用靶点为癌细胞及肿瘤血管上的丝氨酸/苏氨酸及酪氨酸激酶受体。Sorafenib会影响Raf/MEK/ERK信号通路和VEGFR、PDGFR信号通路,从而阻止肿瘤增生及供应肿瘤养份的血管生成,达到抑制肿瘤细胞增殖、抗血管生成的目的。现有临床资料显示,sorafenib对肝癌具有显著的治疗作用,已有的研究表明sorafenib还可以抑制大鼠的实验性门静脉高血压和肝硬化。以上结果提示我们sorafenib可能对肝脏纤维化同样具有治疗作用,但是sorafenib抑制肝脏纤维化的具体免疫学机制尚不清楚。为此,我们便利用CC14诱导的小鼠肝纤维化模型来研究sorafenib是否可以抑制小鼠的肝脏纤维化,以及其抑制肝脏纤维化的具体免疫学机制。研究中,我们利用CCl4诱导野生型及基因敲除小鼠肝脏纤维化模型,注射CCl412小时或2周后,每天sorafenib灌胃,4周后,取小鼠血,清及肝脏,通过血清学测定及肝脏免疫组化检测小鼠肝脏损伤及纤维化水平,同时通过RT-PCR和western blot探究sorafenib抑制小鼠肝脏纤维化的具体免疫学机制,所得实验结果如下：1. Sorafenib抑制CCl4诱导的野生型小鼠肝脏损伤和肝脏纤维化最后一次注射CCl424小时、48小时和72小时后检测小鼠血清中的谷丙转氨酶(alanine aminotransferase, ALT)水平,发现sorafeinb可以降低CCl4注射48小时和72小时后的ALT水平。HE染色、天狼猩红染色和a-SMA免疫组化结果均证实sorafeinb可以降低肝脏损伤和纤维化。荧光定量PCR结果进一步证实sorafeinb可以降低纤维化相关基因Acta2, Collal,Mmp2和Timp1的表达。2.Sorafenib抑制CCl4诱导的野生型小鼠肝脏纤维化并激活STAT3(?)磷酸化STAT3是一种可以被多种因素活化的转录因子,在小鼠肝脏损伤模型中,肝脏中的STAT3具有保护肝脏,抑制肝脏损伤,促进肝再生的作用。Sorafenib最初是以Raf-1激酶为靶点研制的,此外,sorafenib还可以抑制ERK信号通路。我们的研究也证实了肝脏纤维化过程中sorafenib能够抑制c-Raf、MEK和ERK的磷酸化,而ERK又可以负调JAK-STAT信号通路。进一步的研究我们发现sorafenib还可以激活肝实千实质细胞中STAT3的磷酸化。3.Sorafenib通过激活肝实质细胞中STAT3磷酸化抑制CCl4引起的小鼠肝脏纤维化为了进一步确认sorafenib所诱导的肝实质细胞pSTAT3高表达在小鼠肝脏纤维化中的保护作用,我们利用肝实质细胞特异性缺失STAT3的小鼠(hepatocyte-specific STAT3knockout mice, STAT3Hep-/-mice),经CCl4诱导小鼠肝脏纤维化,同时给予sorafenib治疗,免疫组化结果表明,在STAT3Hep-/-小鼠中,sorafenib不再能发挥抑制肝脏损伤、保护肝脏的作用。注射CCl424小时和72小时后,STAT3Hep-/-小鼠血清中ALT的水平显高于野生型小鼠。荧光定量PCR结果也显示STATHep-/-小鼠中纤维化相关基因Acta2, Collal和Timpl的表达均明显高于对照组,且在STAT3Hep-/-小鼠中是否给予sorafenib不会影响这三种胶原相关基因的表达。4. Sorafenib对pSTAT3信号通路及其相关蛋白和细胞因子的影响最近的研究表明在HCC以及TGF-p1介导的EMT体外实验中sorafenib可以抑制pSTAT3的表达。为了进一步研究在CCl4诱导的体内肝脏急性损伤中pSTAT3和sorafenib勺关系,我们给小鼠注射CCl4,6小时后,western blot结果显示sorafenib印制STAT3的磷酸化,然而在注射CCl412小时和24小时后,western blot结果又显示sorafenib可以激活STAT3的膦酸化且小鼠肝脏中pSTAT3的表达水平明显高于对照组。荧光定量PCR的研究发现,与pSTAT3激活相关的细胞因子中,只有IL-6的表达与pSTAT3的表达相一致。综上,我们的研究首次发现和证明了sorafenib可以通过激活肝实质细胞中的STAT3磷酸化信号通路抑制CCU诱导的小鼠肝脏纤维化。