肝素对高糖诱导的水通道蛋白在人腹膜间皮细胞上表达的影响

来源 :大连医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lynacc
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的:水通道蛋白(aquaporin,AQP)是Agre等人于1988年分离红细胞Rh血型抗原的一段32KD多肽的过程中无意得到的一段28KD的多肽,后来被证实为介导细胞内外水转运的通道,在微生物、植物、哺乳动物中广泛存在,并在多种器官的生理和病理中发挥重要作用。本研究旨在通过肝素对葡萄糖诱导体外培养的人腹膜间皮细胞(human perotoneal nesothelial cells,HPMCs)对AQP1、AQP3mRNA及蛋白表达的影响。方法:从连续不卧床腹膜透析(continuous ambulatory peritoneal dialysis, CAPD)治疗的慢性肾脏病患者腹膜透析流出液中分离并培养人腹膜间皮细胞,第二代细胞应用免疫组化方法进行细胞鉴定,第三代细胞用于实验,分别按照不同的实验要求分成2.5%葡萄糖组、2.5%葡萄糖加2.5×10-3mg/ml肝素组、2.5%葡萄糖加5×10-3mg/ml肝素组、2.5%葡萄糖加1.5×10-2mg/ml肝素组。采用逆转录多聚酶链式反应(Reverse transcription polymerase chain reaction , RT-PCR)半定量分HPMCs中AQP1、AQP3mRNA的表达水平,采用免疫细胞化学法检测HPMCs上AQP1、AQP3的蛋白表达水平。结果:一、葡萄糖及肝素诱导腹膜间皮细胞AQP1、AQP3mRNA的影响1、用2.5%葡萄糖、2.5%葡萄糖加2.5×10-3mg/ml肝素分别处理HPMC不同时间后检测,结果显示葡萄糖可显著诱导间皮细胞表达AQP1mRNA上调,并随时间延长而增多,与无糖组比较具有显著的统计学差异,且AQP1mRNA表达量在24小时最大(t=-53.576,P<0.01)。而葡萄糖组与葡萄糖加肝素组比较无显著统计学差异(P>0.05)。2、用2.5%葡萄糖、2.5%葡萄糖加2.5×10-3mg/ml肝素分别处理HPMC不同时间后检测,结果显示葡萄糖可显著诱导间皮细胞表达AQP3mRNA上调,并随时间延长而增多,与无糖组比较具有显著的统计学差异,且AQP3mRNA表达量在24小时最大(t=-43.743,P<0.01)。而葡萄糖组与葡萄糖加肝素组比较无显著统计学差异(P>0.05)。3、用2.5%葡萄糖、2.5%葡萄糖加不同浓度的肝素(2.5×10-3mg/ml、5×10-3mg/ml、1.5×10-2mg/ml)分别处理HPMC 4小时后,检测细胞表达AQP1mRNA的变化。结果显示葡萄糖及葡萄糖加肝素组AQP1mRNA表达均高于无糖组,有显著统计学差异(P<0.05),但葡萄糖组与葡萄糖加2.5×10-3mg/ml、5×10-3mg/ml肝素组比较无显著统计学差异(P>0.05),而葡萄糖加1.5×10-2mg/ml肝素组比葡萄糖组AQP1mRNA的表达量明显增加(t=-37.676,P<0.05)。4、用2.5%葡萄糖、2.5%葡萄糖加不同浓度的肝素(2.5×10-3mg/ml、5×10-3mg/ml、1.5×10-2mg/ml)分别处理HPMC 4小时后,检测细胞表达AQP3mRNA的变化。结果显示葡萄糖及葡萄糖加肝素组AQP3mRNA表达均高于无糖组,有显著统计学差异(P<0.05),但葡萄糖组与葡萄糖加2.5×10-3mg/ml、5×10-3mg/ml肝素组比较无显著统计学差异(P>0.05),而葡萄糖加1.5×10-2mg/ml肝素组比葡萄糖组AQP3mRNA的表达量明显增加(t=-30.578,P<0.05)。二、葡萄糖及肝素诱导腹膜间皮细胞AQP1、AQP3的影响免疫细胞化学结果显示无糖组见棕黄色颗粒主要分布在胞浆和胞膜上;与无糖组比较,葡萄糖和葡萄糖加肝素组阳性表达明显增加,胞核上亦可见棕黄色深染颗粒,有明显统计学差异(P<0.01);AQP1蛋白表达在葡萄糖加1.5×10-2mg/ml肝素组与葡萄糖组及葡萄糖加2.5×10-3mg/ml、5×10-3mg/ml肝素组比较,统计学分析有明显差异(t=4.405,6.066, 4.983, P<0.01); AQP3蛋白表达在葡萄糖加1.5×10-2mg/ml肝素组与葡萄糖组及2.5×10-3mg/ml、5×10-3mg/ml肝素组比较,统计学分析亦有明显差异(t=3.412,5.484,3.667,P<0.01);而葡萄糖组与葡萄糖加2.5×10-3mg/ml、5×10-3mg/ml肝素组比较无明显统计学差异(P>0.05)。葡萄糖组及葡萄糖加1.5×10-2mg/ml肝素组细胞免疫组化图片可见胞核及胞浆有空泡样变,而葡萄糖加常规剂量肝素组无明显空泡样变。结论:1、葡萄糖和大剂量肝素均可显著诱导人腹膜间皮细胞上水通道蛋白mRNA和蛋白的表达上调。常规剂量肝素对人腹膜间皮细胞上水通道蛋白mRNA和蛋白的表达无明显影响。2、从免疫细胞化学图片可以看出葡萄糖组和大剂量肝素加葡萄糖组体外培养的人腹膜间皮细胞胞浆及胞核有明显空泡样变化,常规剂量肝素加葡萄糖组的间皮细胞空泡样表现不明显。
其他文献
目的:明确hENT1在5-FU跨膜转运和返流中的作用,以及返流对5-FU在细胞内浓度的影响。 方法:将能特异性下调hENT1的重组及对照质粒用脂质体法转染到SW1990细胞内,RT-PCR检测hENT
政府采购,是指以政府为主体,为满足社会公共需要,运用财政性资金,按照国家法律、法规及相关政策规定的程序和方式获取工程、货物和服务的行为。  2003年1月1日起开始实行的《中华人民共和国政府采购法》规定,政府采购主要采取公开招标、邀请招标、竞争性谈判、单一来源采购、询价和国务院政府采购监督管理部门认定的其他采购方式等6种形式。  根据政府采购组织规模的不同,可以将政府采购方式分为集中采购和分散采购
摘要:由于自然条件和施工工艺等原因,阳城变电所的接地装置腐蚀严重,接地电阻不合格,通过实施改造措施,消除隐患,解决接地网不合格问题。  一、概述  牵引变电所的接地系统是电气设备正常运行的保障,人身和设备安全,防止雷电和静电危害的措施。在《电力设备接地设计规程》(SDJ-79)中对接地设计电阻有具体的规定,一般<0.5Ω;人们普遍认为变电所中,接地电阻值<0.5Ω认为合格;>0.5Ω就是不合格,不
摘要:实验教学是《电工技术》课的重要组成部分,电工知识的讲授离不开实验,实验教学亦是启发学生思维,调动学生积极性、培养学生动手能力的重要手段,所以在电工教学中应加强实验教学,以进一步提高教学质量。  关键词:实验;教学;动手能力;  【中国分类号】G642.423      为了培养学生学知识用知识,教师应该给出一个宽松的思维环境。要体现学生在实验中的主体地位,让学生成为实验的探索者。因此,教师应
子宫内膜异位症(简称内异症,Endometriosis,EMs)是指具有生物学活性的子宫内膜种植在子宫腔以外的组织中,主要临床症状表现为痛经、不孕、慢性盆腔痛及性交痛等,是育龄期妇女
摘要:小学生对学习产生兴趣,才能促使他们主动地学习。《数学课程标准》提出了要对学生培养数学兴趣的要求;提出了“使学生具有学习数学的兴趣,树立学好数学的信心。使他们体会到数学就在身边,感受到数学的趣味和作用,对数学产生亲切感。”  关键词:数学学习;学习兴趣;数理理趣  【中图分类号】G623.5  一、在活动中的生趣  1.在应用活动中生趣。数学是一门应用性很广的学科,教师要使学生了解数学知识的应
目的:研究氯胺酮雾化吸入对哮喘大鼠氧化应激反应产物及相关蛋白表达的影响。 方法:Brown Norway大鼠随机分为对照组(C组,7只),哮喘模型组(A组,8只),氯胺酮雾化吸入1组(K1组,8只)
膝关节骨性关节炎是老年人较常见的退行性病变,多见于年龄较大的患者,其主要症状为活动受限、局部疼痛,对患者的生活质量有较明显的影响;早期,全膝关节置换术作为治疗骨性关节炎