金黄色葡萄球菌是临床上重要的致病菌,不仅是社区感染常见病原菌,也是医院感染的主要致病菌之一。其致病力强,可以引起皮肤及软组织化脓性感染,还可引起肺炎、关节炎、骨髓炎、心内膜炎、菌血症和脑膜炎等严重感染。长期以来,对病原微生物的鉴定和耐药性分析一直沿用基于培养的表型鉴定法。传统的培养法操作繁琐,耗时较长(18-24h)且对于苛养菌或无法培养的细菌,培养法尤显其不足。检测方法的滞后不仅延误了疾病的诊断,而且导致了经验用药和抗生素不合理使用。针对培养法的上述不足,本研究旨在利用分子生物学技术建立快速检测金黄色葡萄球菌感染及其耐药的方法。第一部分金黄色葡萄球菌快速检测方法的建立和应用评价研究目的：建立基于荧光原位杂交技术快速检测金黄色葡萄球菌的方法,并评价该方法在检测不同类型标本中金黄色葡萄球菌的敏感性和特异性。研究方法：针对金黄色葡萄球菌16sRNA序列设计特异性探针,建立一种荧光原位杂交方法快速检测金黄色葡萄球菌。与传统培养方法比较,评价其对临床感染的检测应用情况。研究结果：荧光原位杂交方法与传统培养方法相比,敏感性和特异性均较好(>95.0%)；检测时间缩短为3-4h。研究结论：基于荧光原位杂交技术(FISH)建立的病原菌检测方法,不仅大大缩短了检测时间,而且敏感性和特异性均较好。第二部分FISH方法和PCR方法检测金黄色葡萄球菌的评价研究目的：评价FISH和PCR两种分子生物学方法检测金黄色葡萄球菌的优缺点。研究方法：采用FISH方法和PCR两种分子生物学方法同时对131涂片检测呈革兰阳性球菌的标本进行检测,检测结果均与传统的培养法结果比较,通过敏感性、特异性、阳性预测值及阴性预测值等指标对两种方法进行评价。研究结果：与传统的培养方法比较,FISH方法的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值分别为100%、100%、100%和100%；PCR方法的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值分别为98.5%、100%、100%和98.5%。研究结论：FISH和PCR两种分子诊断方法的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值等指标均能满足临床应用的要求,均可应用于临床金黄色葡萄球菌的快速检测。FISH方法对实验室空间和仪器要求低,较适合少量样本的检测；而PCR方法对大量样本的检测成本更低。第三部分金黄色葡萄球菌耐药性变迁和耐药机制研究研究目的：调查近12年我院金黄色葡萄球菌耐药特征及耐药性变迁情况。并通过检测耐药基因,分析耐药表型和耐药基因之间的关系。研究方法：通过回顾性分析的方法,调查我院从2000年至2011年12年的金黄色葡萄球菌鉴定及耐药情况,并对其进行趋势分析。采用BD全自动微生物鉴定系统鉴定金黄色葡萄球菌并进行药敏试验。采用PCR方法检测金黄色葡萄球菌的耐药基因,并对两种方法检测的耐药结果进行比较和分析。研究结果：回顾性分析发现,12年期间共分离金黄色葡萄球菌1066株,其感染标本主要来源于脑外科和呼吸内科,尤其以重症监护病房居多；感染标本类型主要有痰液、尿液、伤口分泌物和血液。截至2011年,金黄色葡萄球菌对青霉素、苯唑西林、红霉素、克林霉素、环丙沙星和庆大霉素的耐药率较高,耐药率均在50%以上；尚未发现对替考拉林、利奈唑胺和万古霉素耐药的菌株；对氯霉素和四环素这两种药物的耐药率有降低的趋势。金黄色葡萄球菌对环丙沙星和庆大霉素这两种常用药物耐药率相对增加；对苯唑西林的耐药率缓慢上升,2011年耐药率为58.5%。对其他抗菌药的耐药率变化趋势不明显。本研究对BD全自动微生物鉴定系统鉴定的76例金黄色葡萄球菌进行耐药基因检测分析发现：青霉素耐药相关基因blaZ阳性的有68株；苯唑西林耐药基因：mecA阳性有44株；红霉素和克林霉素耐药相关基因ermA、ermB、ermC和msrA阳性的有31株；四环素耐药相关基因tetK和tetM阳性的有27株；庆大霉素耐药相关基因aac(6’)/aph(2")阳性的有22株。研究结论：金黄色葡萄球菌对苯唑西林、大环内酯类、四环素类的耐药率均较高,且呈多重耐药；本文所检测的耐药基因(mecA、ermA、ermB、ermC、tetK、tetM、 msrA、blaZ、aac (6’)-aph(2"))与细菌耐药表型的符合率较高(>60%)。