1,25-羟基维生素D2是维生素D2的合成衍生物,用于继发性甲状旁腺功能亢进症(SHPT)的治疗,因其较少引起高血钙、高血磷等毒副作用而引起关注。目前上市的剂型有软胶囊剂、注射剂。由于1,25-羟基维生素D2难溶于水,因而增大其水中溶解度成为研究的重点与难点。本研究根据药物的理化性质、药理作用和静脉注射给药的特点,首次研究开发了1,25-羟基维生素D2新型注射用纳米乳剂,解决了药物难溶于水的问题,与现有的上市注射液相比,不但可以增加药物的稳定性,而且显著减少表面活性剂和有机溶剂的用量,从而降低毒副作用,增加临床适用性。该注射用纳米乳剂质量可控、工艺简单、物理化学性质稳定,为1,25-羟基维生素D2药物新剂型的开发奠定了基础。在处方前研究中,根据纳米乳剂的剂型特点及1,25-羟基维生素D2自身理化性质,考察了1,25-羟基维生素D2在不同溶媒与油相中的溶解情况,并建立了高效液相色谱法测定1,25-羟基维生素D2的含量及有关物质。由紫外分光光度计扫描可得,1,25-羟基维生素D2在265nm有最大吸收峰,降解产物在274nm有最大吸收峰,最终确定265nm作为药物含量检测的波长,274nm为有关物质检测的波长,色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶作为固定相;以乙腈-水(85:15)作为流动相。以峰面积(A)对浓度(C)进行线性回归,得回归方程A=201098C-8412.5(R2=0.9998,n=9),说明1,25-羟基维生素D2在0.06~4.00μg/m L范围内具有良好的线性关系,通过回收率试验、重复性试验、精密度试验及样品溶液的稳定性研究表明该方法有较高的精密度、准确度及重现性,各辅料对主药的检测无干扰作用,可用于1,25-羟基维生素D2注射用纳米乳剂的含量及有关物质的测定,为后续注射用纳米乳剂的质量控制和稳定性研究奠定了基础。通过单因素试验考察处方中各组成成分、用量对1,25-羟基维生素D2溶解性的影响,1,25-羟基维生素D2在不同的表面活性剂、助表面活性剂、油相中的溶解性不同,筛选出1,25-羟基维生素D2溶解性较大的表面活性剂、助表面活性剂及油相,绘制三元相图筛选纳米乳的形成区域,通过各处方对纳米乳剂成乳效果的影响,筛选出纳米乳中表面活性剂、助表面活性剂及油相的最佳配比以及制备工艺参数,再通过溶解性以及稳定性的考察,确定最优处方,并在此基础上进行了处方的工艺验证,最终确定最优处方以Tween80(吐温80)作为表面活性剂、乙醇作为助表面活性剂、中链甘油三酯(MCT)作为油相。由于1,25-羟基维生素D2自身理化性质,该药氧化条件下不稳定,易氧化发生降解,应加入抗氧剂,由稳定性考察结果,最终确定加入2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚(BHT)作为抗氧剂。按照优选处方制备注射用纳米乳剂,对其含量、有关物质、pH值、粒径、Zeta电位、渗透压等各项指标进行测定,所制备的纳米乳剂的粒径为20~50nm之间,注射用纳米乳剂pH值在6~8之间,渗透压在285~340mOsmol/Kg之间,确定注射用纳米乳剂的质量标准。对1,25-羟基维生素D2注射用纳米乳剂的稳定性进行了初步研究,结果表明,1,25-羟基维生素D2对光照、温度比较敏感,在光照、高温条件下易发生降解,因此该注射用纳米乳剂需在低温、避光的条件储存;模拟上市包装的条件下,进行了加速(25℃)6个月稳定性考察,结果表明杂质A(1,25-羟基维生素D2的光学异构体)明显增加,其他指标均符合规定。长期(4-8℃)稳定性考察6个月,含量、有关物质等各项指标均符合规定。通过稳定性对比研究结果表明,与上市注射液对比,注射用纳米乳稳定性更高,室温25℃放置1个月,上市注射液含量降低了3.41%,有关物质含量升高到3.29%;注射用纳米乳剂的含量降低了1.65%,有关物质含量升高到0.98%。40℃放置10天,上市注射液含量降低了5.64%,有关物质含量升高到5.96%;注射用纳米乳剂的含量降低到3.68%,有关物质含量升高到3.71%,可见注射用纳米乳剂相较于上市注射液稳定性更高。与上市注射液组成对比,上市注射液中表面活性剂为1%和助溶剂为5%,注射用纳米乳剂表面活性剂仅占0.35%,助溶剂仅占0.075%,降低了表面活性剂与助溶剂的使用量,提高了临床适应性。与上市注射液对比,对注射用纳米乳剂的溶血性及血管刺激性进行体内安全性评价。由血管刺激性试验结果显示,在低中高三个剂量下,本品给药后48h,96h后注射部位均无红肿,充血等刺激性;上市注射液在高剂量下,血管出现轻微红肿现象;由病理切片结果显示,上市注射液高剂量组出现明显的嗜酸性粒细胞升高现象,炎症反应明显,血管内皮出现轻微破损现象,证明上市注射液在高剂量下对血管具有一定刺激性;而本品高剂量条件下未发现明显的炎症反应,且血管壁完整,说明与上市注射液相比,1,25-羟基维生素D2注射用纳米乳剂可以明显降低血管刺激性。由溶血性试验结果可见,本品无溶血性反应。综上所述,本文将1,25-羟基维生素D2制成注射用纳米乳剂,不仅提高了1,25-羟基维生素D2在水中的溶解度,且显著减少了表面活性剂及有机溶剂的使用量,从而降低血管刺激性等毒副作用,并提高了药物的稳定性,本剂型制备工艺简单、质量可控、物理化学性质稳定、使用方便,达到该研究的实验设计目的。