克唑替尼、TAE684对EML4-ALK阳性肺癌细胞株H2228作用的研究

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目的:了解ALK抑制剂克唑替尼(Crizotinib)及TAE684(NVP-TAE684)对EML4-ALK融合基因阳性人肺癌细胞株H2228增殖和凋亡的影响,为临床用药提供依据。材料和方法:从广东省人民医院肺癌研究所获得EML4-ALK融合基因阳性人非小细胞肺癌细胞株H2228并按常规培养至对数生长期。查阅文献,了解克唑替尼及TAE684在既往实验中的半抑制浓度(half maximal inhibitory concentration, IC50)值,设置MTT法中药物的浓度梯度,采用MTT法分别分析克唑替尼和TAE684处理72h后H2228细胞的生长增殖情况。采用流式细胞技术分析克唑替尼处理24、48、72h后H2228细胞凋亡的情况。采用SPSS19.0统计软件进行单因素ANOVA分析,计算细胞生长抑制率,p<0.05表示差异有统计学意义;进行回归、Probit分析,选取95%可信区间,计算各药物对H2228细胞株的IC50。结果:克唑替尼使H2228细胞发生早期凋亡,抑制其细胞增殖。在浓度为10nM/L、30nM/L、90nM/L、270nM/L、810nM/L的浓度下,克唑替尼对H2228细胞的抑制率分别为3.39%、10.51%、22.06%、29.60%、80.23%,抑制作用随药物浓度增加而增加(p<0.05)。克唑替尼对H2228细胞的IC50为334.51nM/L。在浓度为335nM/L的克唑替尼作用下,处理24h、48h、72h的H2228细胞早期凋亡率分别为95.3%、90.0%及68.8%,凋亡率随时间的延长而降低(p<0.01)。未经药物处理及经克唑替尼处理24h、48h、72h的H2228细胞的坏死率分别为0.1%、2.8%、2.0%、0.6%。药物处理后细胞凋亡率与处理前无明显差别(p>0.05)。TAE684不能抑制H2228细胞的增殖。结论:克唑替尼对EML4-ALK阳性细胞株H2228有明显抑制作用,且抑制作用随药物浓度增加而增加。克唑替尼对H2228细胞的半抑制浓度IC50为334.51nM/L。同一药物浓度下,克唑替尼对H2228细胞的抑制作用随时间的延长而降低。克唑替尼对H2228细胞的作用主要为发生早期凋亡,对细胞的坏死无明显作用。TAE684在本实验中未表现出对H2228细胞的抑制作用。
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