白藜芦醇对Mum2c细胞增殖与凋亡的影响及机制研究

来源 :徐州医学院 徐州医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:majian198522
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目的:研究白藜芦醇(Resveratrol,Res)对体外培养的人脉络膜恶性黑色素瘤细胞Mum2c增殖及凋亡的影响,初步探讨其作用机制。  方法:采用体外细胞培养方法,应用含Res浓度为0μg/ml、4μg/ml、8μg/ml、16μg/ml、32μg/ml、48μg/ml、64μg/ml、80μg/ml的RPMI-1640完全培养基培养Mum2c,分别培养24h、48h、72h后,光镜下观察细胞形态变化,采用CCK-8法检测A值,比较各组Mum2c增殖被抑制情况。应用含Res浓度为0μg/ml、16μg/ml、32μg/ml、40μg/ml、48μg/ml的RPMI-1640完全培养基培养Mum2c,培养24h后,AnnexinV-FITC/PI双标流式细胞仪检测各组细胞凋亡率并进行荧光显微镜检查。应用含Res浓度为0μg/ml、32μg/ml、40μg/ml、48μg/ml的RPMI-1640完全培养基培养Mum2c达24h后,应用JC-1检测了解细胞线粒体跨膜电位变化,酶标法检测caspase-3活性,免疫组织化学法检测细胞内Bcl-2表达水平。  结果:Res作用Mum2c后,光镜下可见细胞间间隙增大,胞体皱缩,核染色质边集、凝聚。CCK-8检测显示经16μg/ml及更高浓度的Res作用24h、48h、72h后Mum2c的A值与阴性对照组相比差异有统计学意义(P<0.05),Res浓度与细胞增殖抑制率间具有正相关性。经16μg/ml的Res作用24h后Mum2c早期凋亡率为2.78±0.33%,与阴性对照组(2.02±0.84%)相比差异无统计学意义(P>0.05);经32μg/ml、40μg/ml、48μg/ml的Res作用24h后Mum2c早期凋亡率分别为7.00±0.98%、11.87±0.60%、15.39±1.04%,与阴性对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05),各组组间相比差异具有统计学意义(P<0.05),Res浓度与细胞早期凋亡率间具有正相关性。经32μg/ml、40μg/ml、48μg/ml的Res作用24h后,经JC-1检测荧光显微镜下观察,见随浓度增加红光片下呈低红染色的细胞比例逐渐增加、高红染色的细胞比例相应减少,与阴性对照组比较差异具有统计学意义(P<0.05),各组组间相比差异具有统计学意义(P<0.05);酶标法检测显示各组caspase-3的A值分别为0.246±0.015、0.349±0.037、0.566±0.043,与阴性对照组(0.151±0.010)相比差异具有统计学意义(P<0.05),各组组间相比差异具有统计学意义(P<0.05);免疫组化法检测显示各组Bcl-2表达阳性的Mum2c百分率分别为49.60±1.51%、38.00±1.26%、26.67±1.21%,与阴性对照组(61.33±1.21%)相比差异具有统计学意义(P<0.05),各组组间相比差异具有统计学意义(P<0.05)。  结论:Res能够抑制体外培养的Mum2c增殖并诱导其凋亡,其诱导细胞凋亡机制可能与破坏细胞线粒体膜电位,caspase-3活性增强,Bcl-2表达水平降低有关。
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