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目的：研究盐霉素对前列腺癌细胞系PC-3在体外的克隆形成能力的影响及其与β-catenin和mTOR信号通路的关系,探讨盐霉素抗前列腺癌干细胞的作用机制。方法：盐霉素处理呈对数生长的前列腺癌细胞系PC-3,观察其克隆形成变化；采用流式分析仪检测盐霉素处理PC-3后肿瘤干细胞比例的变化；用WesternBlot法检测盐霉素处理后前列腺癌细胞中的β-catenin和mTOR信号通路的蛋白表达变化；实时定量PCR法检测盐霉素处理后前列腺癌细胞中β-catenin信号通路的靶基因表达水平变化；比较ALDHhigh亚群和ALDHlow亚群克隆形成变化；GSK3抑制剂和雷帕霉素分别处理PC-3,观察其对克隆形成能力的影响并检测其肿瘤干细胞比例的变化。结果：①盐霉素对前列腺癌细胞克隆形成能力的影响：浓度分别为0、0.25uM、0.5uM、luM、2uM和4uM的各处理组的克隆形成数分别为41、39、36、30、18和9。②盐霉素对PC-3中肿瘤干细胞比例的影响：流式细胞仪分析结果显示荧光阴性对照组肿瘤干细胞比例均值为0.05%,空白对照组肿瘤干细胞比例均值为7.40%,盐霉素4uM处理12h组肿瘤干细胞比例均值为1.86%,通过两样本均数t检验,空白对照组与实验组之间差异具有统计学意义(p<0.05)。③盐霉素对不同干细胞亚群细胞增殖能力的影响：ALDHhigh亚群的细胞较ALDHlow亚群具有更强的增殖能力,且盐霉素对前列腺癌干细胞具有选择性杀伤作用,ALDHhigh亚群和ALDHlow亚群的空白组与盐霉素处理组的克隆数分别为20、4、9和5。④盐霉素对PC-3干细胞的β-catenin和mTOR信号通路的影响：克隆形成实验中,空白对照组、盐霉素组、雷帕霉素组和GSK3抑制剂组的克隆数分别为80、51、70和124,流式细胞分析仪检测干细胞比例变化,GSK3抑制剂组高表达ALDH细胞达9.35%,雷帕霉素组中高表达ALDH的比例为1.62%,雷帕霉素+盐霉素组中肿瘤ALDH高表达比例为0.94%,而GSK3抑制剂+盐霉素组的比例为2.95%,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论：(1)盐霉素可以抑制前列腺癌细胞PC-3的增殖,并能有效抗其肿瘤干细胞；(2)盐霉素对β-catenin和mTOR信号通路的抑制作用很有可能是其抗前列腺癌细胞及其干细胞的作用机制之一。