论文部分内容阅读
背景与研究目的膀胱癌是我国最常见的泌尿系肿瘤之一,其中绝大多数为膀胱移行细胞癌,由于具有复发性、侵袭性、产生获得性耐药等特点,其治疗效果常不理想。然而膀胱癌的发生机制尚未完全阐明,吸烟是膀胱癌的首要因素,因此研究吸烟暴露与膀胱癌的关系对阐明膀胱癌的发生机制具有显著的意义。上皮间质转化在细胞恶性转化过程中起到关键的作用。本实验旨在研究吸烟暴露对人正常膀胱上皮细胞上皮间质转化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响,并探讨ERK5通路在上述上皮间质转化的作用。方法采用MTT法筛选对SV‐HUC‐1细胞(人正常膀胱上皮细胞)无细胞毒性的香烟悬液(cigarette smoking extract,CSE)剂量,继而根据无毒剂量处理SV‐HUC‐1细胞。(1)显微镜下观察SV‐HUC‐1细胞形态变化并拍照记录;(2)采用transwell试验检测细胞侵袭能力变化;(3)随后用western blotting和q RT‐PCR方法检测上皮间质转化相关标志物表达变化;(4)采用western blotting分析ERK5通路活性变化,同时检测AP‐1通路蛋白活性变化;继而用ERK5通路特异性抑制剂观察对吸烟诱导的SV‐HUC‐1细胞上皮间质转化作用的干预效果。结果(1)通过MTT实验筛选出0%,0.25%,0.5%,1%CSE浓度作为实验剂量,而2%及以上CSE具有细胞毒性效应,并具有统计学差异(P<0.001);(2)显微镜下观察SV‐HUC‐1细胞在吸烟暴露5天后,细胞呈现分散趋势,细胞形态由椭圆形变为长梭形,少部分细胞可见细长尾巴。transwell试验证实人膀胱上皮细胞经香烟处理后侵袭能力增强。(3)Western Blotting及q RT‐PCR显示SV‐HUC‐1细胞经过吸烟处理后上皮标志物E-Cadherin、ZO-1表达呈现持续性下降,间质标志物vimentin、N‐cadherin表达呈现持续性升高。(4)ERK5通路显著激活,其中磷酸化ERK5(phosphorylated ERK5)持续升高,而总ERK5(total ERK5)持续降低,AP-1通路中phosphorylated c-jun和phosphorylated c-fos表达明显升高。ERK5通路抑制剂XMD8-92可抑制AP-1通路活性,并逆转吸烟诱导的上皮间质转化过程,具体表现为:细胞形态由间质表型长梭状恢复为上皮表型椭圆状,且细胞间分散趋势被有效遏制,细胞呈现相互聚集状态,transwell试验证实细胞侵袭能力下降,Western Blotting及q RT‐PCR结果提示EMT上皮标志物经XMD8-92处理后E-cadherin、ZO-1表达升高,间质标志物vimentin、N‐cadherin表达下降。结论吸烟暴露可诱导人正常膀胱上皮细胞出现上皮间质转化,ERK5通路在上述上皮间质转化过程中起到重要调控作用,ERK5通路抑制剂可通过抑制AP‐1通路活性阻遏上述上皮间质转化作用。这些发现证实了ERK5在吸烟引起的致癌过程中具有重要意义。