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实验目的扁桃体是一个次级淋巴器官,在消化道和呼吸道的交汇处形成韦氏环,是机体典型的黏膜相关淋巴组织,具有隐窝和网状上皮结构。腭扁桃体是口咽扁桃体最具代表性的结构,形成一些病原体的切入位点和复制位点;咽扁桃体是鼻咽扁桃体最具代表性的结构,也是呼吸道相关淋巴组织的一个重要组成部分。在功能上,扁桃体在消化道和呼吸道的开口处提供了一个重要的保护性免疫环,并且在启动免疫应答中起关键作用。本实验运用解剖组织学技术,qRT-PCR,WB,ELISA和免疫组织化学等方法,对不同年龄牦牛腭和咽扁桃体的解剖组织结构及IgA,IgG,SIRPα和CD68的动态表达进行了研究,将进一步为动物比较组织学增添资料,同时为高原医学和运动医学的研究提供理论基础和实验依据。实验材料与方法1.实验材料:健康新生(1-7日龄),半岁(5-7月龄),成年(2-6岁)和老年(7-10岁)牦牛各5头份。2.实验方法:解剖组织学及免疫组织化学技术,qRT-PCR、WB和ELISA等分子生物学技术观察并检测牦牛扁桃体解剖组织结构的发育变化及IgA,IgG,SIRPα和CD68的动态表达。结果1.研究结果表明,牦牛扁桃体具有5个类型,即腭扁桃体,软腭扁桃体,舌扁桃体,咽扁桃体和咽鼓管扁桃体。腭扁桃体,软腭扁桃体和舌扁桃体为口咽扁桃体,口咽扁桃体表面被覆复层扁平上皮,上皮下具有较厚的致密结缔组织,上皮侵入结缔组织形成隐窝,在一些区域,隐窝的复层扁平上皮被非上皮细胞浸润,形成网状上皮。在3个口咽扁桃体中,成对的腭扁桃体最大,似肾形,中央凹陷形成扁桃体窦,扁桃体窦周围外部隐窝和内部隐窝并存,舌扁桃体最小。咽扁桃体和咽鼓管扁桃体是鼻咽扁桃体,鼻咽扁桃体表面主要被覆假复层纤毛柱状上皮,部分区域亦被非上皮细胞浸润形成网状上皮,上皮下结缔组织较少。在2个鼻咽扁桃体中,咽扁桃体最大,表面粗糙不平整,放射排列呈伞状。牦牛除咽鼓管扁桃体外,其余扁桃体均有隐窝,隐窝的数目从高到低依次为腭扁桃体,咽扁桃体,软腭扁桃体和舌扁桃体和咽鼓管扁桃体。此外,成年牦牛各扁桃体内具有发育良好的初级和次级淋巴小结,淋巴小结数目的变化趋势与隐窝一致。2.在成年牦牛各扁桃体内,IgA和IgG抗体分泌细胞均分布在隐窝复层扁平上皮及假复层纤毛柱状上皮下的固有层,网状上皮,淋巴小结,小结间区及腺体周围。CD68和SIRPα的分布情况基本一致,分布在牦牛各扁桃体的淋巴小结,小结间区,排泄管管壁,浆液性腺和浆半月腺细胞及腺体间。CD68和SIRPα在口咽扁桃体分布在复层扁平上皮的角化层、固有层,隐窝上皮,隐窝内腔脱落的上皮细胞中,在鼻咽扁桃体分布在假复层纤毛柱状上皮、固有层和网状上皮。成年牦牛5个扁桃体内IgA,IgG,SIRPα和CD68 mRNA和蛋白的表达量不同,从高到低依次为咽扁桃体,腭扁桃体,软腭扁桃体,舌扁桃体和咽鼓管扁桃体。3.牦牛腭扁桃体的组织特点是,新生组未观察到淋巴小结,在其他3组中,淋巴小结均由初级和次级淋巴小结组成。不同年龄牦牛腭扁桃体内淋巴小结的数目,从新生到成年逐渐增加,并在成年时达到峰值,之后随着年龄的增长而下降。在不同年龄牦牛腭扁桃体内,IgA和IgG抗体分泌细胞均分布在隐窝复层扁平上皮下的固有层和网状上皮,淋巴小结,小结间区及腺体周围。CD68和SIRPα的分布情况基本一致,主要分布在复层扁平上皮的角化层、固有层,隐窝上皮,隐窝内腔脱落的上皮细胞中,淋巴小结,小结间区,排泄管管壁,浆液性腺及浆半月腺细胞及腺体之间。IgA,IgG,SIRPα和CD68mRNA和蛋白在腭扁桃体内的表达趋势与年龄相关,同样与腭扁桃体的大小及其内淋巴小结数目的变化趋势呈正相关,表现为,从新生到成年逐渐增加,并在成年时达到峰值,之后随着年龄的增长而下降。4.牦牛咽扁桃体的组织特点有两点,一个是新生组已观察到发育完整的初级淋巴小结,另一个是老年牦牛咽扁桃体除初级和次级淋巴小结外,出现退化的淋巴小结。与腭扁桃体组织特点一致的是,半岁和成年牦牛咽扁桃体中观察到初级和次级淋巴小结。不同年龄牦牛咽扁桃体内淋巴小结的数目从新生到成年逐渐增加,并在成年时达到峰值,之后随着年龄的增长而下降。在不同年龄牦牛咽扁桃体内,IgA和IgG抗体分泌细胞均分布在假复层纤毛柱状上皮下的固有层和网状上皮,淋巴小结,小结间区及腺体周围。CD68和SIRPα的分布情况基本一致,分布在假复层纤毛柱状上皮、固有层,网状上皮,淋巴小结,小结间区,排泄管管壁,浆液性腺及浆半月腺细胞及腺体之间。Ig A,IgG,SIRPα和CD68 mRNA和蛋白在牦牛咽扁桃体表达趋势与年龄相关,即从新生到成年逐渐增加,并在成年时达到峰值,之后随着年龄的增长而下降。结论1.首次明确牦牛扁桃体具有5个类型,包括腭扁桃体、软腭扁桃体、舌扁桃体、咽扁桃体和咽鼓管扁桃体。腭、软腭和舌扁桃体为口咽扁桃体,被覆复层扁平上皮;咽和咽鼓管扁桃体是鼻咽扁桃体,被覆假复层纤毛柱状上皮。成年牦牛各扁桃体内具有发育良好的初级和次级淋巴小结。结果提示,扁桃体在消化道和呼吸道的交汇处形成重要的免疫防御环。2.成年牦牛各扁桃体内Ig A,IgG,SIRPα和CD68的表达趋势与淋巴小结、隐窝数目的变化趋势呈正相关。结果提示,腭和咽扁桃体是牦牛最具代表性的扁桃体,它们对于机体免疫系统的建立以及免疫反应的实施发挥重要作用。3.新生牦牛腭扁桃体无淋巴小结,而咽扁桃体有初级淋巴小结。半岁和成年咽和腭扁桃体中观察到初级和次级淋巴小结。老年咽扁桃体有退化的淋巴小结。结果提示,牦牛咽扁桃体较腭扁桃体发育早。咽扁桃体的独特结构更适合抗原的吸收和免疫反应的诱导。4.牦牛腭和咽扁桃体内IgA,IgG,SIRPα和CD68的表达趋势与年龄相关,同样与腭和咽扁桃体的大小及其内淋巴小结数目的变化趋势呈正相关。结果提示,腭和咽扁桃体内IgA,IgG,SIRPα和CD68的动态表达与其发育密切相关。