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研究背景:化学治疗(Chemotherapy)是胃癌综合治疗的重要手段之一,但肿瘤细胞多药耐药(Multidrug Resistance,MDR)限制了化疗药物的作用发挥。研究MDR的发生及影响机制,对指导临床合理化选择化疗药物有重要的意义。MDR的产生机制较为复杂,其中耐药基因的激活与表达增加,被认为是MDR的重要因素。肺耐药蛋白(lung resistance protein,LRP)与葡萄糖神经酰胺合成酶(glucosylceramide synthase,GCS)是二种常见的多药耐药基因,在胃癌细胞株中均有较高表达,被认为是引起胃癌多药耐药的重要基因。有研究表明,环氧合酶2(cyclooxygenase 2, COX-2)与LRP、GCS在胃癌组织中均有较高表达,并且COX-2与LRP、GCS在胃癌中的表达呈正相关性,而选择性COX-2抑制剂( cyclooxygenase 2 inhibitors ,COXIBs)可以增加肿瘤对化疗药物的敏感性,其机制目前尚不清楚,可能与下调LRP、GCS等耐药基因的表达有关。本研究就是基于这一出发点而设计。目的:用选择性COX-2抑制剂塞来昔布(Celecoxib)干预胃癌细胞株生长,观察其对胃癌细胞株LRP、GCS二种耐药基因表达的影响,探讨COX-2参与胃癌多药耐药的机制,为临床使用COX-2抑制剂逆转胃癌耐药提供实验理论依据。方法:用选择性COX-2抑制剂塞来昔布干预胃癌细胞株(SGC7901/VCR)培养,同时不加任何干预措施培养SGC7901/VCR细胞株作为对照,采用MTT法检测不同剂量塞来昔布在不同的时间点对胃癌细胞株SGC7901/VCR生长的影响;采用免疫组化及ELISA方法检测塞来昔布在一定剂量范围内某一时间点对SGC7901/VCR细胞的GCS、LRP耐药基因表达的含量,并用方差分析及t检验等统计学方法进行分析,研究塞来昔布对胃癌细胞株耐药基因表达的影响。结果:1)塞来昔布对SGC7901/VCR人胃癌细胞增殖的影响用MTT法分别在24、48、72h测定不同浓度塞来昔布处理的胃癌细胞,12.5μmol/L塞来昔布处理后细胞的存活率分别是98.7%、94.3%、91.2%,25μmol/L塞来昔布的存活率分别是93.6%、86.4%、71.7%,50μmol/L塞来昔布的存活率分别是88.5%、79.8%、58.3%,100μmol/L塞来昔布的存活率分别是75.7%、53.2%、35.4%;200μmol/L塞来昔布的存活率分别是42.3%、35.1%、17.2%。提示塞来昔布呈时间、剂量依赖性抑制胃癌细胞株SGC7901/VCR的生长,促进细胞凋亡。2)ELISA结果:在正常胃癌细胞株中SGC7901/VCR中LRP、GCS两种耐药基因均有表达,其蛋白含量分别为87.84±5.85 ng/ml、12.16±0.92ng/ml。经不同剂量的塞来昔布处理胃癌细胞株,与对照组相比: LRP在四种不同剂量(VLD、LD、MD、HD)组的含量均较对照组有明显下降(分别为71.50±5.90 ng/ml,t=18.891,P<0.01;53.54±3.79 ng/ml ,t=8.973,P<0.01;38.90±4.20 ng/ml,t=5.710, P<0.01;17.48±3.92 ng/ml,t=4.234,P<0.01),VLD组与LD、MD、HD组含量的差别也同样具有显著性。(分别t = 14.246 , P <0.01;t=12.899,P<0.01;t=6.759,P<0.01)。LD组与MD、HD组含量的差别也同样具有显著性。(分别t=12.899,P<0.01;t=6.759,P<0.01)。MD组与HD组含量的差别也同样具有显著性(t=11.240,P<0.01)。GCS在VLD、LD、MD、HD三组的含量也均较对照组有下降(分别为9.22±0.53g/ml,t=17.148,P<0.01;7.86±0.55ng/ml ,t=12.861,P<0.01;6.24±0.45 ng/ml,t=8.945,P<0.01,3.27±0.33ng/ml,t=5.968,P<0.01)VLD与LD组、MD组及HD的含量相比有明显差别(t=19.601,P<0.01;t=11.940,P<0.01;t=7.039,P<0.01),LD组与MD、HD组含量的差别也同样具有显著性。(分别t=19.039,P<0.01;t=8.945,P<0.01)。MD组与HD组含量的差别也同样具有显著性(t=12.651,P<0.01)。3)细胞免疫组化结果:以Image-Pro Plus图像分析软件分析塞来昔布处理后的细胞与空白对照组细胞LRP免疫组化吸光度。在同一时间的不同浓度之间的OD值采用单因素方差分析:24小时方差F=182.83, P<0.01,两两比较:对照组、VLD组?与其它各组间P<0.01,LD组与MD组间P=0.03,MD组与HD组间的P<0.05,48小时方差F=233.46 P<0.01,两两比较:对照组、VLD组与其它各组间P<<0.01,LD组与MD组间P=0.02,MD组与LD组间的P=0.04。在同一浓度的24h与48h的OD值差异则采用t检验,VLD组:t=18.26,P<0.01; LD组:t=20.09,P<0.01;MD组:t=9.43, P<0.01;HD组: t=6.19, P<0.01。同样,以Image-Pro Plus图像分析软件分析各组GCS吸光度。在同一时间点的不同浓度之间的OD值采用单因素方差分析示:24小时方差F=90.57, P<0.01,两两比较:对照组、VLD组与其它各组间P<0.01,LD组与MD组间P=0.03,MD组与LD组间的P<0.05,48小时方差F=470.89, P<0.01,两两比较:对照组、VLD组与其它各组间P<0.01,LD组与MD组间P=0.02,MD组与LD组间的P<0.05。在同一浓度的24h与48h的OD值则采用t检验,VLD组:t=15.22, P<0.01; LD组: t=20.09,P<0.01。MD组:t=17.13, P<0.01;HD组:t=10.65, P<0.01。结论:1:选择性COX-2抑制剂塞来昔布可以抑制胃癌细胞株的生长,促进其凋亡。2:塞来昔布可以降低LRP、GCS在胃癌细胞株的表达, COX-2介导胃癌耐药可能与影响LRP、GCS在胃癌中的表达有关。