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药物诱发的胆汁淤积性肝损伤是由胆汁形成和（或）排泄障碍引起的肝脏病变，与药物本身或其代谢物产生的毒性物质或过敏反应有关。按照疾病产生缘由的不同，可将其分成肝内和肝外胆汁淤积两种类型。当前，对于绝大多数胆汁淤积病症，临床上都缺少卓有成效的医治药物。因此，寻找可以缓解胆汁淤积性肝损伤的药物并应用于临床显得尤为重要。 鸢尾苷元（Tectorigenin,TG）是从鸢尾科植物鸢尾的根茎中提取出的一种二氢异黄酮类物质，具有很强的抗氧化作用。有研究表明，TG可以明显减轻由过氧化氢（H2O2）和四氯化碳（CCl4）等诱导的肝毒性。但是，TG是否可以缓解药物型胆汁淤积性肝损伤，国内外未见相关报道。本文拟采用典型造模剂α-萘异硫氰酸酯（alpha-naphthylisothiocyanate,ANIT）建立急性药物型胆汁淤积性小鼠肝损伤模型，考察TG预处理对ANIT致肝内胆汁淤积性肝损伤的保护作用，并探究其可能的保护作用机制。 本文首先考察了造模前禁食与否是否会影响ANIT致雄性C57BL/6小鼠肝损伤模型的造模效果。结果表明，造模前禁食与不禁食均可成功制备胆汁淤积肝损伤模型，除γ-谷氨酰基转移酶（γ-Glutamyltransferase,γ-GGT）外，禁食组与未禁食组其他生化指标均无统计学差异。因此，本研究中小鼠造模前不禁食。然后，本研究考察了ANIT处理24h和48h后模型组各生化指标的变化。结果表明，ANIT处理24h后模型组丙氨酸转氨酶（Alanine aminotransferase,ALT）、天冬氨酸转氨酶（Aspartate transaminase,AST）、γ-GGT、碱性磷酸酶（Alkaline phosphatase,AKP）、总胆红素（Total bilirubin,TBIL）及直接胆红素（Direct bilirubin,DBIL）等生化指标无明显变化，无明显胆汁淤积性肝损伤；但处理48h后上述生化指标以及总胆汁酸（Total bile acid,TBA）水平均显著升高，提示出现胆汁淤积性肝损伤。因此，后续实验采用ANIT处理48h研究TG的肝保护作用。 本文选用雄性C57BL/6小鼠动物模型，考察TG预处理7天对ANIT致胆汁淤积性肝损伤的保护作用。随机将小鼠分成4组，对照组腹腔注射给予10%HS-15溶液，每日一次，连续给药7天，第5天单次灌胃给予橄榄油；ANIT组腹腔注射给予10%HS-15溶液，每日一次，连续给药7天，第5天单次灌胃给予75mg/kg ANIT；TG50和TG100组分别腹腔注射给予50mg/kg和100mg/kg TG，每日一次，连续给药7天，第5天单次灌胃给予75mg/kg ANIT。ANIT处理48h后，考察小鼠血清中ALT、AST、TBIL、DBIL、AKP、γ-GGT及血清和肝脏中TBA等肝损伤生化指标变化，测定肝脏中谷胱甘肽（Glutathione,GSH）、超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase,SOD）、活性氧（Reactive oxygen species,ROS）及过氧化氢酶（Catalase,CAT）等氧化应激相关指标，肝脏切片采用苏木精-伊红（Hematoxylin-Eosin,H&E）染色，考察肝组织病理学变化。此外，采用LC-MS/MS法对小鼠血浆、肝脏和胆汁中17种胆汁酸浓度进行测定，阐明TG对胆汁淤积性肝损伤胆汁酸内稳态的影响。生化指标测定结果表明，ANIT造模后，血清中各种生化指标较对照组显著升高，但给予TG50和TG100后，上述生化指标均显著下降，且存在剂量依赖性；氧化应激生化指标测定结果表明，TG对ANIT致氧化应激性损伤也具有明显保护作用。H&E染色结果显示对照组小鼠肝小叶结构清晰、细胞无坏死变性、腔内无炎性细胞浸润、胆管结构正常；ANIT造模后肝细胞肿胀变性、出现大面积坏死、同时有大量炎症细胞浸润；TG预处理后，肝细胞坏死区域明显减少，炎性细胞浸润数目也显著降低。胆汁酸浓度测定结果表明，ANIT造模后血浆中8种胆汁酸浓度水平显著升高，肝脏中6种胆汁酸浓度水平明显上升，胆汁中11种胆汁酸浓度水平明显下降；而TG预处理组反向调控不同生物基质中的胆汁酸水平，从而发挥肝保护作用。 为了进一步探究TG的肝保护作用机制，本文采用了实时定量PCR（Real time PCR）和蛋白质免疫印迹（Western blot）的分子生物学技术分别从mRNA和蛋白水平考察胆汁酸转运体与代谢酶以及核因子E2相关因子2（Nuclear factor-E2-related factor2,Nrf2）上下游靶基因的表达变化。Real time PCR结果显示，ANIT造模后，肝脏中胆汁酸CoA连接酶（Bile acid-CoA ligase,Bal）、胆汁酸CoA:氨基酸N-乙酰转移酶（Bile acid-CoA:aminoacid N-acetyltransferase,Baat）、法尼酯X受体（Farnesoidxreceptor,Fxr）、孕烷X受体（Pregnane xreceptor,Pxr）、组成型雄烷受体（Constitutive androstane receptor,Car）和多药耐药相关蛋白2（Multidrug resistance protein2,Mrp2）基因表达量明显下调，而TG组对上述基因表达有上调趋势，此外，TG预处理也可显著上调氧化应激相关基因Nrf2及血红素加氧酶1（Heme oxygenase-1,Ho-1）mRNA表达水平。Western blot结果表明，ANIT造模后肝脏中Fxr、Mrp2及胆汁酸盐输出泵（Bile salt export pump,Bsep）表达明显下调，而经TG处理后，上述基因表达均显著上调，但胆汁酸主要合成与代谢酶Bal、Baat及胆固醇7α-羟化酶1（Cholesterol7α-hydroxylase,Cyp7a1）表达水平没有明显改变。上述结果提示TG可能通过促进核受体Fxr的表达诱导胆汁酸外排转运体Mrp2和Bsep表达，从而促进体内胆汁酸的外排以此减轻胆汁淤积。此外，ANIT造模组Nrf2、谷氨酸-半胱氨酸连接酶催化和调节亚单位（Glutamate-cysteine ligase catalytic/regulatory subunit,Gclc,Gclm）、Ho-1、醌氧化还原酶1（NAD(P)H quinone dehydrogenase1,Nqo1）表达均明显下调，但经TG处理后上述基因的表达均显著上调且呈剂量依赖性。该结果提示TG可通过上调转录因子Nrf2及其上下游相关靶基因的表达来增强机体抗氧化应激，从而发挥肝保护作用。 综上所述，TG预处理7天具有明显保护ANIT致肝内胆汁淤积性肝损伤的作用。TG可能通过以下两个机制发挥作用：（1）上调Fxr表达提高胆汁酸外排转运体Mrp2和Bsep的表达水平，从而促进体内胆汁酸的外排；（2）上调转录调节因子Nrf2上游信号通路促进Nrf2的表达，进一步增加其下游靶基因的表达量从而增强机体抗氧化应激作用。