可中和多种病毒变异株的广谱中和抗体（broadly neutralizing antibodies,bNAbs）,可阻断病毒传播、清除感染病毒及增强机体免疫力,在RNA病毒感染防治中具有巨大的潜力。成熟的B细胞需经历多轮体细胞高频突变,才能进化出高亲和力bNAbs,但其中影响B细胞高频突变的遗传因素尚不明确。本研究拟建立LCMV-CL13病毒慢性感染小鼠模型,识别B细胞发育的关键调节因子并筛选出影响SHM发生的相关基因,为明确bNAbs抗体的产生机制,探索通用疫苗提供理论基础。为建立LCMV-CL13病毒慢性感染小鼠模型,6-8周C57BL/6N小鼠被尾静脉接种2×106 FFU LCMV-CL13病毒,观察小鼠模型临床疾病特征、体重变化,发现小鼠感染后出现明显疾病表现,如竖毛、弓背、体重下降,小鼠体重在7天、32天下降最为明显,感染后每10天取肠、肾、肝、脑等组织,qRT-PCR法检测肠、肾、肝、脑病毒载量,结果发现LCMV-CL13病毒可在小鼠肠、肾、肝、脑等组织保持高水平复制。利用苏木素（Hematoxylin）-伊红（Eosin）染色观察肠、脾、肾、肝、脑组织病理变化,病理学发现LCMV-CL13病毒对肠、脾、肾、肝、脑等组织均有不同程度损伤,因此,病毒感染组与未感染组在病毒复制、病理损伤等方面有较为明显的差异,表明成功建立LCMV-CL13慢性感染小鼠模型。为分析LCMV-CL13病毒感染后小鼠细胞、体液免疫反应,感染后每10天取外周血及血清,流式检测外周血T、B细胞、脾脏GC B细胞比例,发现随感染时间的增加,小鼠CD4+T、CD8+T、CD19+B细胞及脾脏GC B细胞比例发生显著性变化,其中B细胞、脾脏GC B细胞比例随感染时间逐渐增加。ELISA法检测病毒特异性IgG抗体,结果显示小鼠血清持续检测到病毒特异性IgG抗体。进一步分析LCMV-CL13感染小鼠模型的B细胞BCR突变情况,对感染后30、60天小鼠脾脏B细胞进行免疫组库测序,发现BCR重链V基因使用频率下降、突变率显著性升高（P＜0.05）。为筛选B细胞SHM相关基因,LCMV-CL13病毒感染后30、60天取小鼠脾脏制备脾单细胞悬液,通过免疫组库测序分析B细胞高频突变率,RNA-Seq测序分析筛选出差异表达基因。RNA-Seq结果显示,感染后30天组小鼠与NC组相比共有2061个差异表达基因,感染后60天组小鼠与NC组相比共有2466个差异表达基因,感染后60天小鼠与感染后30天小鼠相比共有260个差异表达基因。通过免疫组库（Immune Repertoire,IR）测序分析证明LCMV-CL13慢性感染小鼠B细胞BCR重链V基因发生SHM,RNA-Seq测序分析感染后60天小鼠与感染后30天小鼠相比分别上调下调67、193个基因,GO分析差异表达基因除富集于对外界刺激反应的正向调节功能外,还与生物膜、生物膜组成成分、氧化还原、能量生成、代谢等生物学功能密切相关。KEGG分析差异基因主要富集到补体和凝血级联反应信号通路、细胞因子-细胞因子受体相互作用通路、肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor,TNF）信号通路、氧化磷酸化等信号通路。综上所述,本研究利用LCMV-CL13慢性感染小鼠结合免疫组库、RNA-Seq等高通量测序技术筛选B细胞高频突变的影响基因及信号通路。本研究不仅为慢性病毒感染中B细胞高频突变、抗体进化机制研究提供了切入点,也为阐明抗体进化机制和探寻抗病毒药物、疫苗的有效靶点提供新思路和基础数据。