中国大豆类产品目前的需求正处于高速增长阶段,大豆短缺将直接关系到国家粮食安全。现如今国内大豆市场供需矛盾日益突出,长期以来,国内大豆种植频发连作现象,连作面积已占大豆播种总面积的20%,黑龙江地区尤其严重,近几年大豆连作面积达到50%～70%。为解决大豆连作障碍,提高其产量,本课题拟将研究连作大豆根际土壤中高发病期根腐病病原真菌的多样性和它们的周期性变化特点,并筛选出不同生育阶段的优势根腐病病原真菌,为揭示连作大豆根际土壤优势根腐病病原真菌及其多样性提供理论依据,为采取有针对性的措施防法大豆根腐病奠定基础,对进一步提高东北春大豆的产质量具有重要的意义。本项研究拟将黑龙江省推广面积较大并具有代表性的3个大豆品种垦丰16(KF16)、黑农44(HN44)、黑农48(HN48)种植于正常、连作一年和连作两年地块中。选择大豆苗期和分枝期两个时期取样,分别提取根系和根际土壤样品中的总基因组,针对真菌18S rRNA基因V1+V2区进行PCR扩增,将得到的PCR扩增产物进行DGGE分子梯度凝胶电泳。将不同时期的特征条带和共有条带进行割胶测序,将测序所得序列提交GenBank数据库中进行Blast比对,得出相关种属的序列信息。同时对DGGE图谱进行丰度、优势度、多样性分析。结果表明:连作年限、大豆品种以及不同生育时期均对根系、根际土壤中大豆根腐病病原真菌的DGGE图谱有影响,差异显著。且图谱中各样品的优势种群及优势度最低的种群均有变化,说明连作年限对不同大豆品种根腐病病原真菌群落组成也有显著影响。通过DGGE谱图分析得出:13条条带中分别有终极腐霉菌(Pythium ultimum)、镰胞菌属(Fusarium)、子囊菌属(Ascomycete)、格孢腔菌(Pleosporales)、无爪螨属(Alicorhagia)、立枯丝核菌(Rhizoctonia soani)、毛霉菌属(Mucor)、青霉菌属(Penicillium)以及5种未培养的真菌。对13条DGGE条带测序结果分析表明,试验样地根际土壤环境中的优势根腐病病原真菌主要分为两大类,一类为终极腐霉菌(Pythium ultiimum);另一类为镰孢菌属(Fusarium)。从系统发育树的亲缘关系来看,5种未知的真菌也都与这两类病原真菌有较近的亲缘关系。