目的:冠心病是一种常见的致死致残性心血管疾病,遗传因素对冠心病的发生有重要作用。已有许多研究发现冠心病易感性与基因多态性相关,是由多个基因共同作用并与环境因素相互累加而发病。多个基因的不同突变导致不同人群具有不同的冠心病易感性,从而临床表现各异,治疗效果不同。本研究通过PCR技术及直接测序法对河北汉族冠心病人群CHI3L1基因rs4950928位点、GP6基因rs1671153位点、rs1654419位点的分布情况进行研究,比较各SNP位点等位基因在冠心病人群及正常对照人群中的分布频率,揭示CHI3L1基因、GP6基因的SNP位点突变与冠心病发病的关系及临床意义。方法:本课题选择2013年1月至2015年12月在河北省沧州市人民医院诊治的患者,经彩色多普勒超声、冠脉CT、冠状动脉造影等检查确诊为冠心病患者共1560例,选取性别年龄匹配的同期健康体检者900例。除外感染、肿瘤、糖尿病、先心病、严重肝肾疾病、自身免疫性疾病、心肌炎、严重创伤等疾病。取5ml枸橼酸钠抗凝血,测定纤维蛋白原及D二聚体,取5ml促凝血,用于血清指标和炎症因子的测定。取5ml EDTA-K2抗凝血,提取基因组DNA,采用生物学软件Primer 7.0设计引物,并与Gen Bank进行比对。采用PCR方法扩增目的基因片段,直接测序法进行多态性分析。统计数据在SPSS19.0软件包中完成,各统计指标均以均数±标准差(mean±SD)表示。用基因计数法计算各等位基因频率和基因型频率;冠心病组与对照组间等位基因频率和基因型频率的差异用X2检验;并通过逐步Logistic回归分析CHI3L1基因、GP6基因的SNP位点多态性与冠心病的关系。P<0.05为有统计学意义。结果:1冠心病组和对照组相比较,性别、年龄、饮酒史均无统计学差异(P>0.05),而冠心病组的吸烟率和家族史明显高于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。2冠心病组血清中TG、LDL、Glu、Fbg、D-D、HCY、Hs CRP、CHI3L1、TNF-α、IL-1、GP6、VCAM的浓度均明显高于对照组。差异具有统计学意义(P<0.05),HDL的水平明显低于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。3 CHI3L1基因rs4950928位点CC、CT、TT三种不同的基因型,在冠心病组中的频率分别为0.7808、0.1558、0.0634,CT+TT的频率为0.2192,T等位基因的频率是0.1413,而这三种基因型在对照组中的频率分别为0.9078、0.0756、0.0166,CT+TT的频率为0.0922,T等位基因的频率是0.0544。冠心病组中TT、CT基因型、CT+TT基因型和T等位基因的频率明显高于正常对照组,差异有统计学意义(X2=38.38,33.14,64.42,88.37,P<0.05)。4 GP6基因rs1671153位点CC、CA、AA三种不同的基因型,在冠心病组中的频率分别为0.9276、0.0500、0.0224,CA+AA的频率为0.0724,A等位基因的频率是0.047,而这三种基因型在对照组中的频率分别为0.9466、0.0467、0.0067,CA+AA的频率为0.0533,A等位基因的频率是0.0306。冠心病组中AA基因型和A等位基因的频率明显高于正常对照组,差异有统计学意义(X2=8.723,8.811,P<0.05)。5 GP6基因rs1654419位点TT、TC、CC三种不同的基因型,在冠心病组中的频率分别为0.9288、0.0411、0.0301,TC+CC的频率为0.0712,C等位基因的频率是0.0506,而这三种基因型在对照组中的频率分别为0.9478、0.0378、0.0144,TC+CC的频率为0.0522,C等位基因的频率是0.0805。冠心病组中CC基因型、TC+CC基因型和C等位基因的频率明显高于正常对照组,差异有统计学意义(X2=5.96,8.05,P<0.05)。6逐步Logistic回归:(1)以冠心病(有=1,无=0)为因变量,以CHI3L1基因rs4950928位点基因型(CC=0,CT=1,TT=2)、TNF-α、IL-1、Hs-CRP、家族史(有=1,无=0)、WC、BMI、HCY、Fbg、D-Dimer、TC、TG、HDL、LDL为自变量,进行逐步Logistic回归分析,发现基因型、LDL与冠心病的发病关系密切,能显著增加其风险,是其发病的独立危险因素,OR(95%CI)值分别为2.475(1.172-6.521),1.597(1.12-2.764)(P<0.05)。(2)以冠心病(有=1,无=0)为因变量,以GP6基因rs1671153位点基因型(CC=0,CA=1,AA=2)、TNF-α、IL-1、Hs-CRP、家族史(有=1,无=0)、WC、BMI、HCY、Fbg、D-Dimer、TC、TG、HDL、LDL为自变量,进行逐步Logistic回归分析,发现基因型、HCY、LDL与与冠心病的发病关系密切,能显著增加其风险,是其发病的独立危险因素,OR(95%CI)值分别为9.576(1.753-52.311),1.728(1.112-4.327),2.237(1.013-7.453)(P<0.05)。(3)以冠心病(有=1,无=0)为因变量,以GP6基因rs1654419位点基因型(TT=0,TC=1,CC=2)、TNF-α、IL-1、Hs-CRP、家族史(有=1,无=0)、WC、BMI、HCY、Fbg、D-Dimer、TC、TG、HDL、LDL为自变量,进行逐步Logistic回归分析,发现基因型、LDL、D-Dimer与冠心病的发病关系密切,能显著增加其风险,是其发病的独立危险因素,OR(95%CI)值分别为4.494(1.398-22.292),2.26(1.314-5.13),2.582(1.545-12.218)(P<0.05)。结论:1冠心病组血清中TG、LDL、Glu、Fbg、D-D、HCY、Hs CRP、CHI3L1、TNF-α、IL-1、GP6、VCAM的浓度升高与冠心病的发生密切相关。2 CHI3L1基因rs4950928位点基因多态性在冠心病组的分布明显高于正常对照组,两组存在显著性差异,提示该SNP位点基因多态型与冠心病密切相关,TT基因型显著增加了冠心病的发病风险。3 GP6基因的rs1671153位点基因多态性在冠心病组的分布明显高于正常对照组,两组存在显著性差异,提示该SNP位点基因多态型与冠心病密切相关,AA基因型显著增加了冠心病的发病风险。4 GP6基因的rs1654419位点基因多态性在冠心病组的分布明显高于正常对照组,两组存在显著性差异,提示该SNP位点基因多态型与冠心病密切相关,CC基因型显著增加了冠心病的发病风险。5 CHI3L1、GP6基因突变、LDL、HCY、D-Dimer与冠心病的发病关系密切,是冠心病发病的独立危险因素,对这些因素进行监测可能对预防冠心病发生有益。