哮喘小鼠Galectin-8和MMP-9的表达及布地奈德的干预作用

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目的:探讨哮喘小鼠气道、肺组织中半乳糖凝集素8(Galectin-8)及基质金属蛋白酶9(MMP-9)的表达情况及布地奈德对其表达的影响。方法:建立小鼠卵清蛋白(OVA)致敏和激发的哮喘模型。36只清洁级雌性BALB/c小鼠随机分为3组,每组12只。A组为对照组、B组为哮喘组、C组为布地奈德干预组。A组用生理盐水,B组及C组用OVA/Al(OH)3混合溶液于第1、8、15天腹腔注射致敏,第22天开始用OVA雾化激发,每次30分钟,每周3次,连续6周。激发前1小时,C组予布地奈德1mg雾化进行干预。末次激发后24小时内处死小鼠,观察各组小鼠肺组织的病理情况;免疫组化、RT-PCR分别测定各组小鼠气道及肺组织中Galectin-8、MMP-9蛋白和(?)mRNA的表达。结果:1、肺组织病理改变:HE染色显示B组气道上皮细胞坏死脱落,气道周围平滑肌增厚,气道和血管周围炎性细胞浸润。Masson染色显示B组气道及血管周围较多胶原沉积。C组上述改变较B组减轻。2、免疫组化检测Galectin-8蛋白的表达:200倍显微镜下每张切片随机选择3个视野来测定阳性染色面积所占视野百分比,再取平均值。与A组(0.10%±0.05%)相比,B组(1.10%±0.39%)、C组(0.45%±0.15%)小鼠气道及肺组织Galectin-8蛋白表达增多,差异有统计学意义(P<0.05);与B组相比,C组小鼠气道及肺组织Galectin-8蛋白表达减少,差异有统计学意义(P<0.05)。3、免疫组化检测MMP-9蛋白的表达:200倍显微镜下每张切片随机选择3个视野来计数阳性颗粒数目,再取平均值。与A组(9.91±1.50)相比,B组(38.36±6.34)、C组(20.0±2.90)小鼠气道及肺组织MMP-9蛋白表达增多,差异有统计学意义(P<0.05);与B组相比,C组小鼠气道及肺组织MMP-9蛋白表达减少,差异有统计学意义(P<0.05)。4、RT-PCR检测Galectin-8mRNA的表达:以GAPDH为内参,结果以Galectin-8mRNA与GAPDH灰度值比值的平均值来表示。与A组(0.47±0.03)相比,B组(0.79±0.61)、C组(0.72±0.29)小鼠气道及肺组织Galectin-8mRNA表达增高,差异有统计学意义(P<0.05);与B组相比,C组小鼠气道及肺组织Galectin-8mRNA表达降低,差异有统计学意义(P<0.05)。5、RT-PCR检测MMP-9mRNA的表达:以GAPDH为内参,结果以MMP-9mRNA与GAPDH灰度值比值的平均值来表示。与A组(0.44±0.26)相比,B组(0.76±0.44)、C组(0.58±0.32)小鼠气道及肺组织MMP-9mRNA表达增高,差异有统计学意义(P<0.05);与B组相比,C组小鼠气道及肺组织MMP-9mRNA表达降低,差异有统计学意义(P<0.05)。6、Galectin-8蛋白和MMP-9蛋白的表达量呈正相关(r=0.89,P<0.05)。结论:1、哮喘小鼠气道及肺组织Galectin-8和MMP-9蛋白及mRNA的表达明显升高,并且两者蛋白的表达具有相关性。2、布地奈德干预治疗后小鼠气道及肺组织中Galectin-8和MMP-9蛋白及mRNA的表达下调。
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