氧化葡萄糖酸杆菌的固定化及其活性评价的研究

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氧化葡萄糖酸杆菌(Gluconobacter oxydans)由于其细胞内与膜上含有丰富的氧化还原酶并且结合自身不完全氧化的特征成为生物工业中广泛使用的微生物。本文利用大孔树脂、硅藻土、壳聚糖及其衍生物Catechol-壳聚糖作为固定化载体材料进行G. oxydans的固定化并对其活性评价,通过对固定化材料的选择和固定化方法的优化来达到最佳的固定化效果。第1部分:利用大孔树脂和硅藻土,并对大孔树脂与硅藻土进行多巴胺修饰,壳聚糖及Catechol-壳聚糖作为载体进行氧化葡萄糖酸杆菌的固定化。固定化后,大孔树脂与多巴胺修饰的大孔树脂固定化率分别为62%和83%;活力回收率为66%,68%,硅藻土与多巴胺修饰的硅藻土固定化率为81%和84%,活力回收率65%和61%,壳聚糖与戊二醛交联及Catechol-壳聚糖的固定化率为100%和64%,活力回收率52%和76%。大孔树脂,硅藻土固定化G. oxydans后,菌体与材料的结合力比较弱,菌体容易脱落,在200rpm的摇床上振摇3.5小时后菌体残留量为50%左右。在固定化细胞的重复利用上重点研究了Catechol-壳聚糖与利用戊二醛和壳聚糖进行交联这两种方法,经过6批次反应后相对细胞活性分别为58%和49%。第2部分:利用壳聚糖作为载体材料,戊二醛为交联剂,碳酸氢钠作为致孔剂进行G. oxydans的固定化并研究其活性优化固定化条件:壳聚糖的质量分数为1.5%,戊二醛的质量分数为0.5%,碳酸氢钠的质量分数为10%,产物利用HPLC进行测定。通过对条件的优化,固定化率达到100%,活力回收率达到92%。最优的温度和pH分别为30℃和6.0。在重复利用性方面,固定化细胞在反应12个批次后相对活力达到70%以上,而游离细胞此时的活力不到50%。细胞固定化后在200rpm摇床上振摇60h后固定化的细胞量为100%,不存在细胞泄漏的情况。
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