目的本实验在运用组织块重复贴壁培养原代平滑肌细胞的基础上，复制人脐静脉平滑肌细胞（human umbilical vein smooth muscle cells, HUSMCs）钙化模型，探寻外源性硫化氢（hydrogen sulfide, H₂S）供体硫氢化钠（sodium hydrosulfide, NaHS）对HUSMCs钙化干预机制研究。方法1.原代人脐静脉组织块重复贴壁培养法以改良人脐静脉平滑肌细胞贴壁培养法为基础，将已培养组织块再次接种于新培养瓶中继续培养，用倒置显微镜观察细胞的生长，采用免疫细胞化学方法鉴定为平滑肌细胞。2.H₂S对HUSMCs钙化干预及其机制研究2.1在成功复制HUSMCs钙化模型基础上，给予NaHS进行培养，实验分为6组（n=6）：对照组（10%FBS正常培养液）、钙化组（12mmol/L β-GP）、单纯NaHS组(8.0×10^-6M NaHS)、钙化+NaHS高剂量组(4.0×10^-5M NaHS)、钙化+NaHS中剂量组(8.0×10^-6M NaHS)、钙化+NaHS低剂量组(1.6×10^-6M NaHS)。2.2检测方法①对细胞Von Kossa染色、显微图像分析、碱性磷酸酶（alkaline phosphatase, ALP）活性和细胞钙含量等指标进行检测，观察各组细胞钙沉积情况。②酶联免疫吸附法检测细胞培养液中转化生长因子β1（transforming growthfactorβ1, TGFβ1）的活性。③Real-Time PCR法检测细胞中TGFβ1mRNA及核心结合因子α1（core bindingfactor α1, Cbfα1）mRNA表达。④Western blot法检测HUSMCs中骨桥蛋白（osteopontin, OPN）表达。结果H₂S对HUSMCs钙化的影响及其机制研究①H₂S可明显减少HUSMCs钙结节的聚集生长，Von Kossa染色显示细胞聚集处棕褐色钙结节较钙化组明显减轻（P＜0.05）；NaHS-低、中、高剂量组钙化细胞百分比、细胞钙含量和碱性磷酸酶活性较钙化组明显降低（P＜0.05）。②NaHS-低、中、高剂量组与钙化组相比，培养液中TGFβ1的活性、细胞内TGFβ1mRNA、Cbfα1mRNA表达及OPN表达均较钙化组减少（P＜0.05）。结论H₂S可能通过影响TGFβ1-Smads-Cbfα1信号通路级联效应，减弱信号通路中关键信号分子TGFβ1、Cbfα1表达，减少OPN的表达，发挥抑制HUSMCs钙化的作用。