猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome, PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)引起以怀孕猪繁殖障碍及仔猪呼吸道症状为主要特征的一种免疫抑制性传染病。由ORF5编码的GP5蛋白可以诱导机体产生中和抗体,是最主要的保护性抗原；M蛋白是PRRSV结构蛋白中最保守的蛋白,具有很强的免疫原性,与细胞免疫有关。基于此,本研究将二者作为构建重组活载体疫苗的候选基因。本研究采用RT-PCR从实验室保存的PRRSV毒种中扩增出GP5和M基因,并将测序正确的基因分别定向克隆至真核表达载体pIRESneo的多克隆位点和neor基因处(替代neor基因),构建中间真核表达载体pIRES-GP5-M。以MluⅠ和Bst1107Ⅰ双酶切pIRES-GP5-M,将包含有GP5和M基因的串联表达盒定向克隆至腺病毒穿梭质粒pacAd5 CMVK-NpA多克隆位点处,构建重组腺病毒穿梭质粒rpacAd5 CMVK-NpA-GP5-M。PacⅠ线性化重组穿梭质粒rpacAd5 CMVK-NpA-GP5-M,与限制性内切酶消化的骨架质粒pacAd59.2-100共转染293AD细胞,包装出重组腺病毒并命名为rAd5v-GP5-M。运用PCR技术对重组.病毒进行了初步鉴定,结果表明GP5和M基因被成功整合到腺病毒基因组上；滴度测定表明该重组腺病毒rAd5v-GP5-M的TCID50为10-6.5/ml；间接免疫荧光试验和Western Blot分析表明,GP5和M蛋白均在293AD细胞上得到了表达。此研究为PRRS重组腺病毒疫苗的研制打下了基础。