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这一硕士学位课题由两部分组成,第一部分(第二章)为“膀胱癌肌层浸润相关microRNA异常表达及其生物医学意义”的研究。目的为筛选验证在非肌层浸润性与肌层浸润性膀胱癌组织之间差异表达的microRNA(miRNA),通过在患者术前尿中检测它们的水平,以发现鉴定可术前辅助鉴别诊断“两型”膀胱癌的miRNA作为候选分子标志物；并进行初步的相应功能分析。首先针对研究组前期工作获得的膀胱癌miRNA表达谱芯片数据再挖掘,得到的10个在非肌层浸润性和肌层浸润性膀胱癌组织之间差异表达的miRNA (hsa-miR-199a-3p、hsa-miR-132、hsa-miR-141*、hsa-miR-30e、 hsa-miR-30b、hsa-miR-98、hsa-miR-331-3p、hsa-miR-151-5p和hsa-miR-151-3p)。随后,在曾用于miRNA芯片分析的膀胱癌“起始样本”(45例)中以Real-time PCR的方法对这10个miRNA进行“跨技术平台核查”,以此得到7个miRNA进行了后续膀胱癌组织“独立样本验证”。“独立样本”(54例)验证证实,7个miRNA中的3个,hsa-miR-199a-3p、hsa-miR-30b和hsa-miR-30e,在非肌层浸润性与肌层浸润性膀胱癌组织之间显著差异表达。继而,在96例膀胱癌患者术前尿中检测了游离hsa-miR-199a-3p、hsa-miR-30b和hsa-miR-30e的水平。另外,靶基因预测分析显示,hsa-miR-199a-3p可调控膀胱癌发生通路上的多个关键基因；而且经“起始样本”和“独立样本”两组验证,在“两型”膀胱癌之间的差异表达均具有较高的Fold Change。因此,选择hsa-miR-199a-3p进行后续的功能分析。结果显示,经“起始样本”和“独立样本”验证,膀胱癌组织中,hsa-miR-199a-3p、 hsa-miR-30b与hsa-miR-30e在非肌层浸润性和肌层浸润性膀胱癌组织之间均显著差异表达(均P<0.05)。在膀胱癌患者术前尿中,游离hsa-miR-30b与hsa-miR-30e水平在非浸润性癌和肌层浸润性癌两组之间存在显著差异,有可能成为辅助鉴别诊断“两型”膀胱癌的候选分子标志物。体外实验证实,hsa-miR-199a-3p与SGK2基因的3’UTR区结合；在膀胱癌细胞系5637与T24中上调hsa-miR-199a-3p表达可显著促进细胞增殖。课题第二部分(第三章)为“5个膀胱癌相关基因片段的DNA拷贝数变化及其意义”的研究,目的为探究本实验室前期工作发现的膀胱癌患者肿瘤组织中DNA拷贝数高频率改变的5个基因片段是否为中国(汉族)人膀胱癌特征性的异常改变。首先针对上述5个DNA片段(基因CEP63、FOSL2、GHR、PAQR6、ZFAND3),采用Real-time PCR技术,分析比较它们在白种人来源的商品化基因组DNA、30例健康中国汉族人外周血白细胞、51例膀胱癌患者肿瘤组织及配对的外周血白细胞的基因组DNA样品中拷贝数改变情况。结果显示,除ZFAND3外,另外4个基因在白种人商品化基因组DNA与中国健康人外周血白细胞样品之间均存在DNA片段拷贝数差异。与中国健康人白细胞相比,膀胱癌患者肿瘤组织中CEP63(P<0.001)、GHR(P=0.019)和PAQR6(P=0.001)DNA片段拷贝数增加；FOSL2(P=0.41)和ZFAND3(P=0.062)无显著改变。与中国健康人白细胞相比,膀胱癌患者的外周血白细胞样品中CEP63(P<0.001)和PAQR6(P<0.001)拷贝数增加,FOSL2(P<0.001)和ZFAND3(P<0.001)拷贝数减少,而GHR(P=0.220)无显著改变。与膀胱癌患者自身外周血白细胞基因组DNA相比,在肿瘤组织中,CEP63(P<0.001)、FOSL2(P<0.001)、GHR(P<0.001)和ZFAND3(P<0.001)拷贝数增加,而PAQR6(P=0.325)拷贝数无显著改变。上述分析结果提示,基因CEP63、FOSL2、GHR和PAQR6在中国汉族人与白种人之间存在显著的DNA片段拷贝数差异。在汉族人群中,CEP63、GHR基因片段的拷贝数增加可能是在膀胱癌发生发展过程中获得的肿瘤特征性异常改变；而PAQR6拷贝数增加则很可能是膀胱癌患者所携带的遗传变异。