本研究工作分为两部分： 　　第一部分：米诺环素对大鼠和小鼠脑外伤的部分保护作用。 本实验为了系统评价米诺环素究竟有无临床治疗脑外伤价值，在大鼠脑撞击伤、小鼠闭合性脑外伤、小鼠脑冷冻伤三个常用的脑外伤动物模型观察该药对不同脑外伤的疗效。米诺环素于手术前2天开始给予，每天2次，每次45mg/kg腹腔注射；手术前30min及手术后1h，各给药1次；手术后第1、2天，每天给药1次。观察手术后行为学变化，在14天后计算脑损伤面积及神经元数量。 结果发现，大鼠脑撞击伤可表现神经功能、脑水肿及形态学明显改变，而米诺环素能加快肢体功能(爬板角度)恢复，抑制损伤侧脑半球面积的增加(显示其能抑制脑水肿)，但对其他指标无明显作用；小鼠脑闭合性损伤引起明显的学习记忆功能的损害，以及损伤侧神经元减少，但不引起明显的神经功能缺失，米诺环素能抑制神经元减少，改善闭合伤引起的学习记忆功能下降，对其它行为学变化无明显作用；小鼠脑冷冻伤是闭合性物理损伤，损伤灶较局限，损伤后神经功能、学习记忆改变不明显，但有明显的形态学改变，并且其死亡率也能用于药物作用的评价，米诺环素能减少小鼠死亡率及脑损伤面积，对神经元减少的保护作用不明显。 结果显示：米诺环素对三种不同脑外伤模型，在损伤后14d内均有不完全的、不同的治疗效果。另外，由于动物种类、损伤程度、代偿功能的不同，不同脑外伤模型都有各自特点。 第二部分：半胱氨酰白三烯受体1和2在缺血性损伤诱导PC12细胞死亡中的不同作用 近年来，本实验室发现半胱氨酰白三烯受体-1 (CysLT1受体)选择性拮抗剂普鲁司特(pranlukast, ONO-1078)和孟鲁司特(montelukast )对大鼠和小鼠局灶性脑缺血和全脑缺血均有保护作用，能够改善缺血后的神经症状，减少梗死体积，降低血脑屏障的通透性，减轻脑水肿及神经元死亡。然而，在原代培养神经元上，未能观察到CysLT1受体拮抗剂的保护作用。 为了深入研究CysLT1和CysLT2受体在缺血性损伤过程中的作用，本文在神经元样细胞--大鼠嗜铬细胞瘤株PC12细胞上稳定表达CysLT1和CysLT2受体，以缺氧缺糖(oxygen乡ucose deprivation, OGD)诱导体外缺血性损伤，用Hoechst33258和PI染色以及流式细胞仪，测定OGD诱导的细胞死亡率，探讨两种受体亚型及其拮抗剂的作用。 研究发现，PC12/mCysLT2(转染小鼠CysLT2受体)细胞的胞体面积明显增大，而PC12/WT(转染pcDNA3.0空质粒)和PC12/mCysLTI(转染小鼠CysLT1受体)细胞没有明显改变。OGD 6小时主要诱导细胞晚期凋亡和少量的坏死，Hoechst/PI染色和流式细胞仪测定结果均显示，PC12/mCysLT2细胞的凋亡率和坏死率，比PC12/WT细胞明显增加，而PC12/mCysLT1细胞的凋亡和坏死率明显减少，提示两种受体表达的水平可以调节PC12细胞对OGD损伤的敏感性。CysLT1受体选择性拮抗剂孟鲁司不能逆转PC12/mCysLT1细胞引起的凋亡减轻，而非选择性的白三烯受体拮抗剂Bay u9773能抑制OGD诱导的细胞凋亡，尤其是在CysLT2受体高表达的PC12/mCysLT2细胞。白三烯受体激动剂LTD4也可以诱导细胞凋亡，PC12/mCysLT2细胞对此最为敏感，Bay u9773对此同样有抑制作用。 结果显示，在OGD诱导的PC12细胞死亡过程中，CysLT1和CysLT2受体可能起着不同的作用;CysLT1受体使细胞死亡减轻，而CysLT2受体则使细胞死亡加重。缺血性损伤