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人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(neutrophil gelatinase-associated lipocalin, NGAL)与炎症、胚胎发育、免疫应答、趋化作用、信号转导以及多种肿瘤的发生与发展等过程密切相关,是新的早期肾损伤生化标志物。本研究旨在应用噬菌体展示技术筛选NGAL特异性抗体,并建立免疫胶体金检测技术,为体内NGAL变化水平的检测提供方法,为急性肾损伤的诊断提供帮助。本论文采用免疫的Balb/C小鼠,从其脾脏中提取总RNA,以反转录的cDNA为模板,通过设计的简并引物来扩增轻链可变区(VL)和重链可变区(VH),经过重叠延伸PCR方法连接为单链抗体基因(scFv)。经sfiI、Xbal双酶切后连接到噬菌体载体pCantab5E中,转化大肠杆菌TGl成功构建了库容为5×107pfu的鼠源噬菌体抗体库。经过PCR检测,抗体库的插入率为85%。随机挑取部分单克隆测序分析发现抗体重链和轻链可变区序列均不相同,说明了本研究构建的鼠源噬菌体抗体库多样性较好。以重组蛋白NGAL作为靶蛋白对噬菌体抗体库进行了四轮富集,从第四轮筛选后的抗性平板上挑取了30个单克隆进行了噬菌体抗体ELISA鉴定,将阳性克隆构建CHO细胞表达载体,转染到CHO细胞中并进行压力筛选、重组表达,对表达纯化后的抗体进行了SDS-PAGE、ELISA效价及亲和力分析。结果表明,单克隆有11个为强阳性。ELISA测定抗体效价为1:107,抗体亲和力为6.532×10-9M。表明本论文成功获得了NGAL基因工程抗体,为NGAL检测诊断方法的建立提供了物质基础。应用重组表达的抗体与实验室制备的多抗,建立了NGAL免疫胶体金检测方法。确定了免疫胶体金层析方法最优条件：金标抗体标记量12μg/mL,金标抗体的稳定剂为0.08%的PEG-20000,金标抗体的保存液为20 mM pH 8.2硼酸缓冲液(含0.01%Na2N3、0.08% PEG-20000);结合垫处理液为20 mM pH 9.0 Tris-HCl(含0.5% PVP-40、0.5% Trion)、样品垫处理液为0.01 mol/L pH 7.4 TBS(含1% BSA、0.05% Tween20)、金标抗体喷涂量为0.5μL/mL、羊抗NGAL抗体喷涂量为1.2μL/mL、羊抗人的IgG喷涂量为4μL/mL。将试纸条分别置于37℃及4℃密封干燥避光保存,到第20周其敏感性和特异性均没有降低。使用该试纸条对40份临床样本进行了检测,结果与临床检测结果完全一致。上述结果表明,本论文建立的免疫胶体金检测方法的稳定性、特异性较高,在临床样品检测上有较高的价值。