安全免疫耐受型人胚胎干细胞的建立及其潜在应用

来源 :南方医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:sw
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
人胚胎干细胞(Human Embryonic Stem Cells,hESCs)拥有无限的自我复制与更新能力且能保持其分化成任何一种体细胞的多能性,在再生医学中具有广阔的应用前景。宿主对来源于hESCs的移植物的免疫排斥是阻碍其发展的关键性瓶颈之一。另一方面,当前抑制宿主免疫排斥的各种策略均会不可避免地增加hESCs及其移植物的癌变风险。
  为了解决上述问题,本论文的研究目的是建立一株耐受宿主免疫排斥、癌变风险安全可控的人胚胎干细胞株,并初步探讨这种胚胎细胞潜在应用于心梗治疗中的可行性。利用细菌人工染色体同源重组基因编辑技术在hESCs的HPRTl位点上敲入CTLA4-Ig、PD-L1和TK这3个基因,建立了hESCs-CPTK。CTLA4-Ig和PD-L1的共同表达能诱导hESCs.CPTK及其衍生而来的细胞耐受免疫排斥,自杀基因TK的表达能使得hESCs-CPTK及其衍生而来的细胞可以在体外或体内被美国FDA批准的基因治疗药物更昔洛韦(Ganciclovir,GCV)所清除。
  在一种具有人免疫系统的小鼠模型上验证了hESCs-CPTK的相关功能。流式细胞术和免疫荧光染色法的结果显示hESCs-CPTK在人源化小鼠体内形成的畸胎瘤的T淋巴细胞浸润率显著低于野生型hESCs形成的畸胎瘤,提示hESCs能耐受人源化小鼠的免疫排斥;小鼠体内来源于hESCs-CPTK的畸胎瘤能被腹腔注射的GCV所消除,表明hESCs-CPTK癌变风险安全可控。荧光定量PCR和流式细胞术结果表明hESCs-CPTK具有胚胎干细胞的多能性,且能在体外被诱导分化生成心肌细胞。免疫荧光染色法验证了人源化小鼠体内来源于hESCs-CPTK的心肌细胞耐受人源化小鼠免疫排斥的同时能通过腹腔注射GCV被消除。相对于小鼠,大鼠具有更大的体型,在心跳频率上与人类更接近,更适合应用于心梗研究。因此,建立了具有人免疫系统的大鼠模型、严重免疫缺陷的大鼠心梗模型及成功在心梗大鼠模型的心脏中移植了hESCs分化而来的心肌细胞,为后续进一步研究hESCs-CPTK对心梗的治疗作用奠定了基础。
  本论文通过基因编辑技术,在诱导hESCs免疫耐受的同时降低了hESCs的癌变风险,并在具有人免疫系统的人源化小鼠上验证了这两种作用。hESCs.CPTK具有分化成为心肌细胞的能力,可以作为细胞来源潜在应用于心梗治疗。建立的相关大鼠模型将促进hESCs-CPTK治疗心梗的进一步研究发展。
其他文献
学位
该文在前人反问句研究成果的基础上,以认知语言学、功能主义语言学、语义学、语用学等有关理论为指导,结合问卷调查和语音实验的方法,对现代汉语反问句的性质、认知度、声学特征、语义等问题进行了系统研究.全文共有7个部分:"引言".交待了研究的起因、研究的理论意义和实际意义等.第1章"反问句"研究综述.从反问句的定义、性质、功能、答句系统、语用环境、影响反问句的语义因素等方面,对现代汉语的反问句已有的研究成
学位
社会快速发展,人们的审美水平不断提高,书籍的发展是人们审美水平的重要表现。封面设计中应用元素的丰富,封面和内容的统一,以及书籍设计理念的转变,都揭示了近几年的书籍封面设计发展的进步;在未来纸还是书籍的主要载体,而电子书的设计至今不完善。本文以第六次和第七次两次全国书籍设计艺术展为依据,为设计师以后更好的了解书籍设计发展方向提供了参考。
学位
本文通过用“建筑场”的概念来对中国传统建筑群落的空间组织形式进行解读,在中国传统哲学中的空间概念的基础上,对楠溪江古村落、北京四合院、紫禁城与曲阜孔庙等典型传统建筑群落等建筑实践进行分析,探讨了宗族制度影响下的聚合式场空间、风水观念影响下的限定场空间以及儒学观念影响下的中轴式吸附场空间等中国传统建筑中“场”的构成形式,来深入探讨依赖于由文化传统、社会结构、固有习惯等“文化合力”所限定的中国传统建筑
学位
购物空间导识系统的设计在国内还属于一个较新的研究领域,课题的研究重点在于,购物空间导识系统中视觉要素的研究,在色彩和材料方面做一定的尝试。目的在于形成一定的理论基础,为今后的深入研究打好基础。本文建立在图形符号认知分析的基础上,从色彩、光照、材料、比例、尺寸几个方面进行分析,并得出实际应用的原则,从而建立既有美观性又有实用性的导识系统。  随着商业的发展与城市的繁荣,城市建筑环境有了较大的发展,大
学位
杂草稻(Oryza sativa f.spontanea)与亚洲栽培稻(Oryza sativa L)同属禾本科(Gramineae或Poaceae)稻属(Oryza)AA基因组型,无生殖障碍可以进行基因交流。杂草稻的颖果为红色果皮,是原花青素色素在颖果果皮层中不断积累导致的,未成熟之前杂草稻颖果为绿色,只有在种子成熟的后期才能显现红色。Rc和Rd基因是控制原花青素合成的关键基因。研究原花青素含量
学位
背景和目的:老年痴呆(Alzheimer’s disease,AD)是一种起病缓慢、不可逆转的,伴有认知功能障碍和进行性记忆能力受损为特征的中枢神经系统退行性疾病。病因迄今未明。氧化应激假说是AD发病机制的假说之一,即氧化应激增强促进Aβ沉积和Tau蛋白过度磷酸化,加速老年斑、神经元纤维缠结的形成,而这一效应又进一步加强氧化应激,使上述病理改变间形成恶性循环,促进AD的发生发展。目前,临床上治疗A
学位
集约化农业在增加作物产量、满足粮食需求的同时也产生了很多问题,如土壤质量下降、生物多样性降低和生态系统服务功能受损等。土壤生物作为衡量土壤健康程度的重要指标,其多样性及各组分之间的相互作用也可决定土壤生态系统功能的发挥。作为生态系统工程师的蚯蚓,在影响土壤物理结构和物质循环的同时也会影响其他土壤生物。尽管以恢复生物多样性为主的生态集约化农业管理措施已越来越受到重视,但仍缺乏土壤动物蚯蚓对土壤微生物
学位
先天性免疫系统是宿主依靠模式识别受体识别细胞应激反应和外源病原体,其中炎症小体是先天性免疫系统的重要组成部分。炎症小体是能够识别病原体相关的分子模式和宿主细胞的危险信号(危险相关的分子模式)的多蛋白大复合物。NLRP3炎症小体是目前研究最为清楚的炎症小体,它主要由NLRP3,ASC和pro-Caspase-1构成。NLRP3炎症小体能够调控细胞因子IL-1β和IL-18的成熟和分泌,这些细胞因子对
哺乳动物体内含量最多的金属元素是铁,铁在维持机体正常代谢中起到至关重要的作用。脑内各个脑区间存在着铁的差异性分布,但对脑内铁含量变化的具体生理机制并不清楚。脑铁代谢的异常与神经精神疾病密切相关。在衰老过程中,不同形式的铁沉积在运动和认知相关的脑区,而在出生时,这些脑区铁含量很少,以往的猜测认为轴突转运参与其过程中,但一直缺乏实验证据支持脑内铁可通过轴突转运的观点,为此进行了大脑区域间的功能铁传输是
学位