花椒黄酮成分提取分离及抗氧化活性研究

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花椒(Zanthoxylum bungeanum)属芸香科(Rutaceae)植物,是我国一种传统药食两用原料。花椒含有丰富的黄酮类成分,但国内外对花椒黄酮的研究较少。本文研究了花椒黄酮的提取、测定、分离、结构验证与抗氧化活性,试验主要内容如下(1)通过紫外-可见光扫描,对比黄酮测定的显色体系.选择硝酸铝-亚硝酸钠显色法测定花椒黄酮。对四种不同产地的花椒总黄酮含量测定,花椒(茂汶)总黄酮含量194.4mg/g,青花椒(云南)189.0mg/g,花椒(韩城)167.4mg/g,青花椒(四川)162.0mg/g。HPLC测定4种花椒中芦丁和槲皮素的含量,花椒(韩城)中芦丁含量最高17.29mg/g。HPLC测定花椒黄酮水解液中黄酮苷元的含量,槲皮素含量最高,可达42.97mg/g。(2)通过正交试验法对花椒黄酮提取工艺进行优化,考察了提取温度、料液比、时间及乙醇浓度四个因素对花椒黄酮得率的影响。试验结果表明,各因素对黄酮提取得率的影响程度由大到小依次为:提取温度>乙醇浓度>料液比>浸提时间,最佳工艺条件为:乙醇浓度60%,提取时间1h,料液比1:40g/mL,提取温度70℃,在此条件下花椒黄酮的得率为19.87%。(3)采用大孔树脂法纯化花椒黄酮,选取效果最好的AB-8型大孔树脂进行纯化。最佳条件为:上样浓度3.0-4.0mg/gL;上柱pH4.5左右;上柱速度2.5mL/min,洗脱剂最适宜体积分数与洗脱剂用量分别为70%和3BV。经AB-8型大孔吸附树脂纯化后,花椒黄酮的纯度由51.46%提高到90.25%,提高了1.75倍。(4)采用清除DPPH自由基、还原力测定、总抗氧化力测定和抑制脂质体过氧化能力模型评价花椒黄酮的抗氧化能力,并与抗坏血酸进行了对比。实验结果表明:花椒黄酮具有良好清除DPPH自由基作用,具有较强的还原力、抗氧化能力和抑制油脂氧化能力。纯化花椒黄酮抗氧化能力强于未纯化样。(5) HSCCC分离花椒黄酮研究中,以氯仿-甲醇-正丁醇-水(4:3:0.5:2,V/V)为溶剂体系。先进行正向洗脱,分离得5种黄酮化合物化合物。再调换流动相进行反向洗脱,得到六个化合物。将经HPLC检测纯度达到85%以上的4个化合物A、B、C、D进行核磁共振氢谱结构验证。A为槲皮素-3-阿拉伯糖苷;B为槲皮素-7-葡萄糖苷;C为芦丁;D为槲皮素-3-半乳糖苷。
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