去甲万古霉素HPLC法和EMIT法测定方法的比较及患者血药浓度监测结果的相关分析研究

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去甲万古霉素属糖肽类抗生素,其化学结构与万古霉素相近,抗菌谱和抗菌作用与万古霉素相仿。糖肽类抗生素,是治疗革兰氏阳性菌尤其是耐甲氧西林金葡菌(MRSA)感染的首选药物。随着耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)和甲氧西林表皮葡萄球菌(MRSE)引起的感染日渐增多,去甲万古霉素的应用越来越频繁。去甲万古霉素不良反应大,治疗窗较窄。因此,在临床使用过程中,对其进行血药浓度监测十分必要。目前,去甲万古霉素的测定方法有荧光免疫偏振法(FPIA)、高效液相色谱法(HPLC),还有少数实验者用液相色谱-质谱/质谱联用法(LC-MS/MS)﹑酶免疫放大法(EMIT)等,各具优缺点。日常监测中需要一种简便﹑快捷﹑准确的测定方法。目的:分别建立HPLC法和EMIT法测定血浆中去甲万古霉素浓度的方法,比较HPLC法和EMIT法测定患者血浆中去甲万古霉素浓度的方法学相关性。对监测结果进行相关性分析研究,为临床去甲万古霉素的合理使用提供理论依据。方法:不同测定方法的比较:分别采用HPLC法和EMIT法建立了血浆中去甲万古霉素浓度的测定方法,并分别验证这两种方法的精密度与准确度﹑稳定性。收集使用过去甲万古霉素患者的血浆样本,分别用HPLC法和EMIT法对其浓度进行测定,对测定结果进行回归分析,比较相关性。患者血药浓度监测结果的相关性分析研究:用EMIT法测定105例血浆样本中去甲万古霉素的浓度,并与年龄、肾功能以及基础疾病等进行相关性比较分析。结果:HPLC法去甲万古霉素和万古霉素的保留时间分别为8.0min,11.0min。标准曲线为:Y=0.0207C-0.0003,r=0.9997,线性范围为2~100μg/ml,最低检测浓度为2μg/ml。低、中、高3种浓度(4、40、80μg/ml)的平均提取回收率(%)分别为101.6±10.09,107.2±2.23,107.7±1.53,日间、日内RSD均小于15%。EMIT法标准曲线:Y=-3.4×10-7C3-9.5×10-6C2+0.0042C+0.3034,r=0.9999,线性范围为2~50μg/ml,最低检测浓度为2μg/ml。HPLC法和EMIT法测定去甲万古霉素样品结果线性回归方程为Y=0.9395X-1.934(Y:EMIT法μg/ml,X:HPLC法μg/ml),r=0.9217。两组数据配对t检验结果:P>0.05。血肌酐正常组与大于正常值组比较,P<0.05。年龄60~75岁组和>75岁组比较,P<0.05。结论:HPLC法测定血浆去甲万古霉素和EMIT测定法具有较好的相关性,所监测患者去甲万古霉素血药浓度与年龄﹑肾功能﹑基础疾病﹑联合应用抗生素等有一定相关性,进行血药浓度监测十分必要。
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