目的:本研究为了消除内源LMNA的干扰,利用慢病毒感染技术在体外培养LMNA敲除的293T细胞中构建稳定表达LMNA R527C突变蛋白的细胞系;研究LMNA R527C突变对细胞增殖,迁移,周期,调亡及相关信号通路的影响,探讨LMNA R527C突变与核纤层蛋白病发生相关的信号通路分子机制。方法:患者外周血细胞提取总RNA,逆转录PCR获得c DNA,PCR扩增获得LMNA突变ORF区;分子克隆技术将LMNA突变与慢病毒表达质粒构建重组质粒,将病毒三质粒包装系统转染进293T细胞产生并收获病毒,通过病毒感染LMNA敲除的293T细胞,嘌呤霉素筛选和挑选单克隆,DNA测序和western blot鉴定获得LMNA突变稳定表达细胞系;细胞分为五组:正常293T细胞作为对照组（293T）,敲除LMNA的293T细胞作为敲除组（293T LMNAKO）,敲除LMNA后重新表达LMNA的细胞作为拯救组（293T LMNA）,表达LMNA G608G突变的细胞作为G608G突变组（293T LMNA G608G）,表达LMNA R527C突变的细胞作为R527C突变组（293T LMNA R527C）,敲除组正向研究LMNA的功能,拯救组反向验证LMNA的功能,G608G突变组作为显性突变对照;采用免疫荧光实验检测细胞核及细胞骨架的形态结构,采用CCK8实验和平板单克隆形成实验检测细胞增殖能力,进行细胞划痕愈合实验和Transwell实验检测细胞迁移侵袭能力,使用流式细胞仪检测细胞周期和凋亡,进行Western blot检测相关信号通路的蛋白表达水平。结果:1.成功获得LMNA敲除后LMNA重新表达,LMNA G608G突变表达和LMNA R527C突变表达的三种细胞系。2.与对照组相比较,敲除组、G608G突变组和R527C突变组细胞的细胞核形态结构异常（p<0.05）;突变的Lamin A发生聚集不连续,定位也发生改变。3.与对照组相比较,敲除组、G608G突变组和R527C突变组细胞的骨架形态结构异常,对细胞核的附着受到干扰（p<0.05）。4.细胞增殖能力:敲除组、G608G突变组、R527C突变组比对照组和拯救组细胞的增殖能力增强（p<0.01）5.细胞迁移能力:敲除组、G608G突变组、R527C突变组比对照组和拯救组细胞迁移能力增强（p0.05）。7.相关信号通路的蛋白表达水平:与对照组和拯救组相比,敲除组和突变组细胞的Rb表达水平下降（p<0.01）,p16表达水平上升（p0.05）;EMT通路相关E-cadherin、Snail表达水平下降（p<0.01）,Vimentin表达水平上升（p0.05）,NF-κb相关通路IκBα表达水平下降（p<0.01）,p50、p65表达水平上升（p<0.05）。结论:1.LMNA R527C突变会引起细胞核异常,出现畸形核,并影响细胞核与细胞骨架之间的联系。2.LMNA R527C突变会抑制了Rb的表达水平,上调p16表达水平,导致细胞增殖和克隆形成能力增强;此外,NF-κB信号通路受到LMNA R527C突变的影响,p65表达水平上升,从而抑制E-cadherin表达,细胞迁移速度加快。