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背景:脑血管疾病在当代社会中是一个普遍存在的疾病,在人群中有着高发病率、高致残率和高死亡率的特点。而动脉粥样硬化是导致脑血管疾病的主要原因,动脉粥样硬化是一个慢性炎症过程,其发展过程包括脂质在血管壁的沉积、血管内皮细胞功能障碍、血管平滑肌细胞向内膜的迁移和增殖、炎症细胞在病变血管的聚集和泡沫细胞的形成。动脉粥样硬化斑块主要包括稳定斑块和不稳定斑块,即易损斑块。斑块结构包括脂质核心、纤维帽、胆固醇结晶、新生血管和细胞外基质。斑块内脂质核心的坏死,细胞外基质降解,纤维帽变薄破裂,新生血管生成都可以导致动脉粥样硬化斑块的易损性,使斑块破裂,引发血栓形成、脑卒中等脑血管疾病。目的:通过研究TSP-1/CD47/VEGF/VEGFR2信号通路对动脉粥样硬化（atherosclerosis,AS）中易损斑块新生血管的负性调控作用,包括下调VEGF的表达及VEGFR2下游磷酸化,进而抑制新生血管生成,从而讨论TSP-1/CD47信号通路在动脉粥样硬化斑块中的作用及其之间的调控机制。方法:给予8周龄载脂蛋白E缺陷（apoE-/-）雄鼠高脂喂养,取不同时间点（sham组、4周、8周、10周、12周）apoE-/-雄鼠的腹主动脉,观察其油红染色中脂质成分含量、蛋白质印记（Western blot）中TSP-1、CD47、VEGF、VEGFR2的表达;在高脂喂养6周和8周时加入抗CD47（B6H12）药物,继续高脂喂养2周后通过Western blot中TSP-1、CD47、VEGF、VEGFR2的表达变化。在人脐静脉内皮细胞（HUVECs）中,加入一定浓度的脂多糖（LPS）,形成HUVEC的炎症模型。在此模型中分别加入抗TSP-1（LSKL）、外源性TSP-1、抗CD47（B6H12）药物干预后,即正常对照组（control组）、control+LPS组、LSKL组、外源性TSP-1组、抗CD47组,采用Western blot观察HUVECs中TSP-1、CD47、VEGF、 VEGFR2的蛋白表达水平。结果:1.8周龄ApoE-/-雄鼠高脂喂养按不同时间点获取腹主动脉后进行油红O染色,利用Image-Pro Plus 6.0对油红染色的脂质含量进行统计分析,结果显示,不同实验组相比,apoE-/-小鼠腹主动脉脂质含量在8周时达到高峰,说明小鼠腹主动脉动脉粥样硬化程度在8周时最严重,脂质含量明显增加（P<0.001）,且加入抗CD47药物干预后,高脂喂养8周时小鼠腹主动脉脂质含量明显增加（P<0.01）。高脂喂养8周时小鼠腹主动脉的脂质含量与10周和12周相比也显著增加（P值分别为P<0.01,P<0.001）。2.8周龄ApoE-/-雄鼠高脂喂养按实验分组获取腹主动脉,提取总蛋白后利用Western blot法检测分析HIF-1、TSP-1、CD47、VEGF、VEGFR2的蛋白表达水平,以GAPDH为内参蛋白,其比值为相对蛋白表达量。结果显示:在apoE-/-小鼠腹主动脉实验组内各因子的蛋白表达如下:HIF-1在高脂喂养8周时表达量最高。与对照组相比,apoE-/-小鼠高脂喂养8周时蛋白表达量显著增加（P<0.001）,与高脂喂养12周相比,高脂喂养8周HIF-1的蛋白相对表达量显著升高（P<0.01）;TSP-1在高脂喂养10周时表达量最高。与高脂喂养4周相比,10周时TSP-1蛋白表达量显著增加（P<0.001）,与高脂喂养12周时相比,高脂喂养10周TSP-1的蛋白表达明显增加（P<0.05）;CD47在高脂喂养8周时表达量最高。与对照组相比,8周时CD47蛋白表达量明显增加（P<0.05）,与高脂喂养12周时相比,高脂喂养8周CD47的蛋白表达亦明显增加（P<0.05）;VEGF在高脂喂养8周时表达量最高。与对照组相比,8周时VEGF蛋白表达量明显增加（P<0.05）,与高脂喂养10周和12周时相比,高脂喂养8周CD47的蛋白表达亦明显增加（P<0.05）;VEGFR2在高脂喂养8周时表达量最高。与对照组相比,8周时VEGFR2蛋白表达量显著增加（P<0.01）,与高脂喂养10周时相比,高脂喂养8周VEGFR2的蛋白表达也明显增加（P<0.05）,与高脂喂养12周时相比,高脂喂养8周VEGFR2的蛋白表达亦显著增加（P<0.001）。3.8周龄ApoE-/-雄鼠高脂喂养,分别在高脂喂养6周和8周时加入抗CD47（B6H12）,在2周后（8周和10周）获取不同组别小鼠腹主动脉,提取总蛋白后利用Western blot法检测分析HIF-1、TSP-1、CD47、VEGF、VEGFR2的蛋白表达水平,以GAPDH为内参蛋白,其比值为相对蛋白表达量,结果表明:与未加药物高脂喂养同周龄的小鼠相比,加入抗CD47后小鼠腹主动脉CD47的表达明显下降（P<0.05）,HIF-1的蛋白表达亦明显下降;与高脂喂养8周不加药组相比,高脂喂养8周加药组TSP-1的蛋白表达明显下降（P<0.05）,与高脂喂养10周不加药组相比,高脂喂养10周加药组TSP-1的蛋白表达显著下降（P<0.05）;高脂喂养8周加药组与高脂喂养8周不加药组相比,VEGF的蛋白表达显著下降（P<0.01）;高脂喂养8周加药组与高脂喂养8周不加药组相比,VEGFR2让的蛋白表达明显下降（P<0.05）。4.按照实验分组,将培养好的各组细胞提取总蛋白进行Western blot检测分析各组别间TSP-1、HIF-1、CD47、VEGF、VEGFR2的相对表达量,以GAPDH作为内参蛋白进行对照,各待测因子分子量与内参比值作为其相对表达量。结果显示:HUVECs加入LPS后,HIF-1、CD47、VEGF、VEGFR2的表达量均增加,而TSP-1表达下降（P<0.05）。TSP-1拮抗剂（LSKL）、外源性TSP-1和抗CD47（B6H12）药物作用时,HIF-1的表达不具有统计学意义,而TSP-1、CD47、VEGF、VEGFR2的表达均收到影响。结论:（1）apoE-/-雄鼠高脂喂养8周时体内腹主动脉脂质含量达高峰,动脉粥样硬化程度最严重。（2）apoE-/-雄鼠高脂喂养后,HIF-1、CD47、VEGF、VEGFR2等表达量在8周时达高峰,而TSP-1表达增加时CD47、VEGF、VEGFR2等表达量均下降。（3）TSP-1/CD47/VEGF/VEGFR2通路通过抑制新生血管生成来调控动脉粥硬化进展。HIF-1/CD47/VEGF/VEGFR2信号通路可促进新生血管形成加速动脉粥样硬化进展。（4）炎症反应时HIF-1表达增加,通过HIF-1/VEGF通路影响动脉粥样硬化斑块稳定性。（5）TSP-1拮抗剂和CD47拮抗剂均可以增加HUVECs内VEGF和VEGFR2的表达;外源性TSP-1减少HUVECs内VEGF和VEGFR2的表达。（6）TSP-1/CD47信号通路通过影响VEGF和VEGFR2的表达抑制血管新生。