【摘 要】
：
目的:观察三碘甲状腺原氨酸（triiodothyronine,T3）对MC3T3-E1细胞自噬的影响,探究自噬在T3介导的MC3T3-E1细胞成骨分化及矿化中的作用及机制。方法:（1）予不同浓度（0、1n M、10 n M、100 n M）的T3作用于MC3T3-E1细胞,以及予T3干预MC3T3-E1细胞不同时间（0、3h、6h、24h）后,通过蛋白免疫印迹法（Western Blot,WB）检
论文部分内容阅读
目的:观察三碘甲状腺原氨酸（triiodothyronine,T3）对MC3T3-E1细胞自噬的影响,探究自噬在T3介导的MC3T3-E1细胞成骨分化及矿化中的作用及机制。方法:（1）予不同浓度（0、1n M、10 n M、100 n M）的T3作用于MC3T3-E1细胞,以及予T3干预MC3T3-E1细胞不同时间（0、3h、6h、24h）后,通过蛋白免疫印迹法（Western Blot,WB）检测自噬相关蛋白LC3-II/I和P62的表达情况;将细胞分为空白对照组、T3组、CQ组以及T3+CQ组,通过WB检测LC3-II/I和P62蛋白表达情况;10 n M T3干预MC3T3-E1细胞3小时后,通过免疫荧光观察LC3内源性聚情况以及透射电镜观察自噬小体结构。（2）自噬抑制剂巴弗洛霉素A1（Bafilomycin A1,Baf Al）阻断自噬作用后,通过实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR,q RT-PCR）检测各组（空白对照组、T3组、Baf Al组以及T3+Baf Al组）成骨分化指标Runx2、Osterix、I型胶原（Type I collagen,Col I）、骨钙素（osteocalcin,OCN）基因表达情况;通过碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）染色和茜素红染色（alizarin red staining,ARS）观察自噬对成骨分化及矿化能力的影响。（3）机制探讨:WB检测自噬信号通路AMPK、ULK1蛋白表达;si RNA下调AMPK表达后观察下游蛋白表达和自噬变化及其对成骨分化的影响。结果:（1）不同浓度T3作用于细胞3h后,与对照组相比,10 n M与100 n M处理组均能显著提高MC3T3-E1细胞中LC3-II蛋白表达水平;10 n M T3分别处理细胞0、3h、6h、24h,结果显示:与对照组对比,随干预时间增加,处理组的LC3-II蛋白表达水平均升高,而P62的蛋白表达水平逐渐下降。在使用氯喹后,相较于单独使用T3,T3联合氯喹干预后细胞LC3-II蛋白表达水平进一步升高。接着通过免疫荧光法观察到T3处理组LC3内源性聚集显著增多;透射电镜结果显示T3处理组自噬体增多,提示T3诱导自噬增强。（2）将细胞分为空白对照组、T3组、Baf Al组以及T3+Baf Al组,成骨诱导分化7天和21天后检测成骨分化标志基因Runx2、Osterix、Col I、OCN表达,相较于单独使用T3,T3联合Baf Al处理细胞后上述基因表达下降,ALP染色强度显著减弱,ARS染色结果显示矿化结节数量明显减少,表明自噬的抑制减弱了T3的促成骨分化及矿化能力,提示自噬在T3介导的成骨分化及矿化过程中发挥重要作用。（3）T3作用于MC3T3-E1细胞后通过WB检测到p-AMPK（Thr172）、p-ULK-1（ser555）蛋白表达升高;下调AMPK表达后,p-AMPK（Thr172）、p-ULK-1（ser555）、LC3-II以及Runx2蛋白表达显著下降,提示T3可能通过AMPK/ULK-1信号通路调控自噬,进而影响MC3T3-E1细胞成骨分化及矿化过程。结论:（1）T3作用于MC3T3-E1细胞后诱导自噬增强;（2）T3可能通过AMPK/ULK-1信号通路介导的自噬促进MC3T3-E1细胞成骨分化及矿化。
其他文献
正己烷（n-Hexane）是一种具有蓄积毒性的常用工业有机溶剂,由于其职业暴露人群众多且呈女性化、年轻化的特点,正己烷及其主要毒性代谢产物2,5-己二酮（2,5-HD）对女性健康的影响特别是生殖健康的影响日益受到关注。目前国内外研究表明,正己烷及2,5-HD可导致女（雌）性生殖功能损害,干扰卵巢颗粒细胞的生存与凋亡进而损害卵巢可能是其重要毒性机制之一。细胞凋亡涉及非常复杂的调控机制,其中细胞周期的
目的:饮水中矿物质与人类寿命有关,为了解饮水中矿物质种类、数量、比例对人类生命周期的影响,通过观察水中锶对水蚤生存期的影响,并以水蚤和小鼠为研究对象深入探究其影响机制,进一步阐明饮水中矿物质对水蚤生存期的调控作用,为研究水与人类健康长寿提供科学理论基础。方法:1.通过观察水蚤品种之一蚤状溞在五种饮用水（纯水、自来水、富氢水、过滤水、矿泉水）中的生存期,并测定五种饮用水的水质指标及水中常见矿物元素含
目的:探讨耳穴埋豆对硬膜外分娩镇痛产妇产时及产后排尿情况、分娩结局、舒适度、疼痛、焦虑及抑郁的影响。方法:选择2020年5月至2021年1月在某三级甲等妇幼专科医院产房进行阴道试产并接受硬膜外分娩镇痛的240例初产妇作为研究对象,利用随机数字表,随机分为干预组和对照组各120例。干预组按硬膜外分娩镇痛常规护理加耳穴埋豆,对照组按硬膜外分娩镇痛常规护理。最终剔除接受阴道助产及中转剖宫产及退出、资料不
背景:探讨单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）对移植血管疾病血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖的影响及雷公藤内酯醇能否抑制MCP-1引起的移植血管疾病内膜增厚。MCP-1在体外对血管平滑肌细胞的这些特性有影响,雷公藤内酯醇药物在过去被证明是有效的,但在目前的动物模型大鼠中已被重新考虑。本论文旨在提高对移植血管疾病中MCP-1异常表达及其对血管平滑肌细胞增殖的影响的认识,并通过检测增殖细胞核抗原（PCN
目的:糖尿病肾病（Diabetic kidney disease,DKD）是糖尿病最严重的并发症之一。在我国的发病率越来越高,目前已成为终末期肾脏病（End stage renal disease,ESRD）的第二位原因,仅次于各种肾小球肾炎。许多研究显示糖尿病引起的长期高血糖会导致肾脏细胞炎性浸润,加重肾组织的损伤。课题组前期研究开发的姜黄素衍生物FM0807具有良好的抗炎、抗氧化作用。因此,本
目的明确小豆蔻明（Cardamonin,CAR）诱导卵巢癌细胞凋亡、抑制细胞增殖的作用及作用机制是否与降低Raptor蛋白表达抑制谷氨酰胺酶（glutaminase,GLS）蛋白表达有关。方法1细胞培养用含10%胎牛血清、100 mg·m L-1链霉素及100 U·m L-1青霉素的Mc Coy’s 5A、RPMI1640培养基在37℃、5%CO2条件下,分别培养卵巢癌SKOV3细胞、Raptor
研究背景:目前,高尿酸血症（HUA）已经成为一种常见的慢性代谢性疾病,临床使用的降尿酸药物均存在一定的不良反应,因此,亟需研发高效低副作用的降尿酸新药。从民间中草药挖掘高效低毒药物是一条发现新药的重要途径,雀嘴茶作为滇中地区民间常用治疗痛风的保健茶,含有丰富的活性物质,但目前雀嘴茶的降尿酸物质基础尚未明确。研究目的:明确雀嘴茶的降尿酸的物质基础,探索雀嘴茶活性单体化合物降尿酸的作用机制,为开发出新
溃疡性结肠炎（Ulcerative colitis）是一种由多因素引起的慢性肠道炎症,临床表现为慢性腹泻、持续性脓肿、血便等。长期慢性炎症通常导致并发症结肠直肠癌的产生。溃疡性结肠炎被列为无法治愈的疾病之一。目前临床常用治疗药美沙拉秦缓释颗粒,能够调节免疫和炎症反应。然而仍存在某些副作用。姜黄素具有较强的抗氧化、抗炎以及抗肿瘤活性,FM0807是姜黄素与水杨酸的酯化衍生物,研究表明,比姜黄素表现出
原发性肝细胞癌（Hepatocellu Lar carcinoma,HCC）是常见的恶性肿瘤之一,肿瘤转移、复发是导致治疗后患者死亡的主要原因。静止与衰老肿瘤细胞增殖缓慢或不增殖,但是与肿瘤的转移复发关系密切。本课题在确定C086具有明显的抗肝癌作用的基础上,进一步研究C086通过抑制Hsp90对静止期肝癌细胞与衰老肝癌细胞的影响。目的:研究C086体外对衰老与静止期肝癌细胞的抗肿瘤活性及其机制。
目的:课题组前期的研究表明浒苔多糖（Enteromorpha polysaccharides,EP）能通过SREBP2-HMGCR通路发挥降胆固醇作用。但人体摄入的绝大多数生物活性多糖不能在小肠直接被消化吸收,有研究表明生物活性多糖能够被肠道菌群发酵降解,进而发挥代谢调节等作用。因此本研究通过高脂高胆固醇饲料喂养诱导建立C57BL/6小鼠高胆固醇血症模型,同时给予小鼠不同浓度梯度的浒苔多糖干预,探