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目的:在中医理论指导下,将抗肝纤维化作用环节明确的几种中药成分组成中药成分复方,使之既具有传统中药复方多成分多靶点发挥药效的特点,又弥补了中药复方难以在体外开展机制研究的不足,对研创可以阐明机制又有质控保证的中药复方作有益探索。方法:1、筛选四成分最佳配伍剂量:以丹参酚酸B、红景天苷、青蒿琥酯、白藜芦醇为研究对象,采用CCl4腹腔注射诱导小鼠肝纤维化模型（造模共6w,自第二周起灌胃给药）,采用均匀设计法“四因素八水平”分组设计,以肝组织Hyp含量为筛选指标,并用DAS3.0软件NOMEN（Non-Linear Mixed-Effect Modeling）分析获得最佳有效剂量;2、筛选三成分最佳配伍剂量:以丹参酚酸B、红景天苷、青蒿琥酯为研究对象,CCl4诱导的小鼠肝纤维化模型（腹腔注射造模6w,第二周起给药）,采用均匀设计法“三因素八水平”分组设计,以肝组织Hyp含量为主筛选指标,AST、ALT、胶原面积为辅助筛选指标,用DAS3.0软件NOMEN分析获得最佳有效配伍剂量;3、以CCl4诱导的肝纤维化小鼠验证成分复方的药效:以三成分筛选结果为基础,以扶正化瘀浸膏为对照,在最佳配伍组分基础上加减不同组分及剂量设计分组,观察CCl4小鼠肝组织Hyp含量和血清肝功能的变化,以及肝组织病理及胶原纤维程度的变化,对所得最佳配方进行验证,最终确定最优配伍为丹红青方;4、以BDL诱导的肝纤维化大鼠验证丹红青方:以丹红青方为观察对象,以扶正化瘀浸膏为阳性对照,观察BDL大鼠肝组织Hyp含量和血清肝功能以及肝组织病理及胶原纤维程度的变化,进一步验证丹红青方抗肝纤维化作用;5、丹红青方抑制HSCs活化、迁移和收缩实验:（1）丹红青方（丹参酚酸B 10μM、红景天苷10μM、青蒿琥酯50μM）温育HSC 24h,在12h时,加入TGF-β1（10ng/ml）,观察丹红青方抑制HSCs活化、增殖的作用。蛋白检测采用Western blot,m RNA检测采用RT-PCR;（2）以划痕法观察,丹红青方及PDGF-BB（10ng/ml）温育LX-2后,在第8h观察迁移面积变化,用Image J软件分析计算迁移面积,观察丹红青方抑制LX-2迁移的作用;（3）用凝胶收缩法观察,JS 1接种凝胶上,以丹红青方温育30min后加入ET-1（10n M）在第12h观察凝胶直径及面积变化,并用Image J软件分析计算凝胶面积,评估丹红青方抑制JS 1收缩的作用。6、全转录组测序实验:采用KAPA RNA Hyper Prep Kit with Ribo Erase（HMR）for Illumina?建库试剂盒构建文库,检测丹红青方抗CCl4模型小鼠基因的变化,用Bowite2.1.0将结果映射到最新的UCSC转录集,用RSEM软件估计基因表达水平,用GO功能富集和KEGG富集法分析主要差异基因。结果:1、⑴丹参酚酸B、红景天苷、青蒿琥酯和白藜芦醇四成分不同剂量的配伍可不同程度降低肝纤维化模型小鼠肝组织Hyp含量和胶原沉积面积以及ALT、AST的活性以发挥抗肝纤维化的作用（均P<0.05）。⑵数字模型分析结果显示最优组方由红景天苷+青蒿琥酯+白藜芦醇,配伍剂量为红景天苷474 mg·kg-1体重、青蒿琥酯62 mg·kg-1体重、白藜芦醇319 mg·kg-1体重,但药物之间没有交互作用。2、以肝纤维化程度变化的数字模型分析结果筛选出的最优组方是红景天苷+青蒿琥酯,考虑到丹参酚酸B抗肝纤维化的实际药效,确定丹参酚酸B、红景天苷和青蒿琥酯组成三成分复方。3、在CCl4诱导的肝纤维化小鼠开展的验证实验显示,筛选实验的B组3种成分的配比复方抗肝纤维化的药效相对突出,与扶正化瘀方相似,将其命名为丹红青方。4、进一步在BDL大鼠肝纤维化模型验证丹红青方的药效,其抗肝纤维化的药效显著（P<0.05）,不差于扶正化瘀方和任何一种成分。5、丹红青方能抑制TGFβ1诱导的HSC活化和增殖（P<0.05）、抑制PDGF诱导的HSC迁移和活化（P<0.05）、抑制ET-1诱导的JS 1收缩（P<0.05）。6、丹红青方使肝纤维化小鼠肝组织内部分基因发生显著差异变化,这些基因主要富集在4条与组织代谢相关的信号通路。结论1.通过均匀设计的动物实验,以药效学指标评价,获得丹参酚酸B、红景天苷和青蒿琥酯三种成分的特定比例剂量的配方,命名为丹红青方。2.通过CCl4和BDL两种肝纤维化动物模型验证了丹红青方抗肝纤维化的药效。综合评判其药效较其组成成分相对突出,且与扶正化瘀方相似。3.丹红青方保持各单体的生物功能,其具有明显地抑制TGF-Β1诱导的HSC活化的作用、PDGF诱导的HSC迁移的作用以及ET-1诱导的HSC收缩的作用。4.丹红青方可以使肝组织内基因发生表达差异显著变化,其集中的信号通路与课题组前期发现丹参酚酸B、红景天苷、青蒿琥酯各自调控的通路相似。