背景和目的:最初发现DENND2B可抑制Hela细胞的成瘤性。DENND2B基因表达三个蛋白亚型,包括p126、p82、p70。p126的PR2序列可优先与c-Abl sh3的结合,并激活了MAPK/ERK 2信号通路,但p70可干扰c-Abl-p126复合物协同激活ERK 2的活化。未见文献报道DENND2B在乳腺癌中的病理机制。乳腺癌是最常见的恶性肿瘤之一,是导致女性癌症死亡最常见原因之一。由于环境污染、食物安全、精神压力、不良的生活方式及基因遗传等的威胁,乳腺癌发病率和死亡率正逐渐增加并且有年轻化趋势。虽然乳腺癌治疗方法得到改进和病人的治愈率液得到提高,但仍然有一部分乳腺癌(特别是三阴性乳腺癌)无法早期发现并且极易发生远处转移。因此研究DENND2B在乳腺癌发生发展起的功能机制对诊治乳腺癌具有重要意义。方法与结果:通过早期WESTERN BLOT、RT-PCR及IHC实验分析乳腺癌组织中DENND2B的表达规律,可发现DENND2B在乳腺癌中低表达;并且通过实验分析多种乳腺癌细胞系中DENND2B的表达规律,结果显示DENND2B在三阴性乳腺癌MDA-MB-468细胞中低表达。通过MSP方法检测乳腺癌细胞MDA-MB-468和乳腺癌组织中DENND2B是否发生高甲基化,数据分析显示DENND2B启动子发生高甲基化;并且通过去甲基化试剂5-aza处理MDA-MB-468细胞后,DENND2B恢复表达,因此实验进一步验证DENND2B的启动子发生高甲基化。通过细胞体外实验CCK8、周期实验、凋亡实验及动物体内荷瘤实验探究DENND2B的功能。上调DENND2B可抑制乳腺癌细胞MDA-MB-468增殖及成瘤性并促凋亡;下调DENND2B则促进乳腺癌细胞MDA-MB-468增殖及成瘤性并抑制凋亡。运用WESTERN BLOT检测ERK、JNK、P38、GSK3β的磷酸化水平,结果显示上调DENND2B,ERK、JNK磷酸化水平明显降低及GSK3β磷酸化水平明显升高;下调DENND2B后,ERK、JNK磷酸化水平则明显升高及GSK3β磷酸化水平明显降低。因此实验数据分析可得出DENND2B通过抑制ERK、JNK、GSK3β活化从而抑制MAPK信号通路及WNT/β-CATENIN信号通路从而发挥抑癌功能。结论:本论文通过分子、细胞及临床组织初步揭示:DENND2B在乳腺癌组织和细胞MDA-MB-468中低表达,在乳腺癌中DENND2B高甲基化导致基因沉默,DENND2B具有抑癌功能,DENND2B通过调控MAPK/ERK、MAPK/JNK和WNT/β-CATENIN信号通路影响乳腺癌的生长。