纤维素类物质和半纤维素是自然界中最廉价、最丰富的可再生资源,p-葡萄糖苷酶和p-木糖苷酶是降解它们最关键的酶类。为了利用丰富的纤维素资源和半纤维素资源,就必须获得性质优良的,p-葡萄糖苷酶和p-木糖苷酶。真菌来源的,p-葡萄糖苷酶和p-木糖苷酶是目前纤维素酶和半纤维素酶研究的主要部分。本实验室已经对葡萄穗霉的全基因组进行了测序,并对部分基因进行了功能注释,为本实验奠定了基础。本实验首先从葡萄穗霉中挖掘可能的,β-葡萄糖苷酶和β-木糖苷酶的基因：glu4340、glu10158、glu13629和xy16382、xy15851、xy1449、 xy1640,并根据其基因序列分别设计了引物,以葡萄穗霉基因组DNA为模板,通过PCR技术分别扩增到长度为911bp、2508bp、3392bp和1395bp、1857bp、2376bp1143bp的片段,将片段克隆连接到穿梭载体pGAMDm上,结果表明,获得的片段为需要的目的基因。最后通过原生质体-PEG转化到黑曲霉G1上,SDS-PAGE结果显示,β-葡萄糖苷酶glu10158和p-木糖苷酶xy1449两种基因均能够重组表达,外源蛋白的分子量分别为88kDa和68kDa,与预期大小相符。将得到的目的转化子进行发酵培养后,测定了粗酶液的酶活及相关酶学性质。酶活测定结果显示,基因glu10158所表达的蛋白GLU10158具有p-葡萄糖苷酶活性,比活达18461U/mg,其最适温度为50℃,最适pH为5.0,在60℃的条件下保温60min后酶活力仍在50%以上。在pH3.8-7.4的条件下保温30min后仍具有80%以上的酶活力。基因xyl449所表达的蛋白XYL449具有p-木糖苷酶活性,比活达137.5U/mg,其最适温度为50℃,最适pH为6.6,在60℃的条件下保温60min后酶活力仍在60%以上。在pH5.6-8.0的条件下保温30min后仍具有50%以上的酶活力。