构建新型电化学DNA传感器检测结核分枝杆菌的研究

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结核分枝杆菌DNA的检测是检测结核分枝杆菌,诊断结核病的重要方法。传统检测结核菌的方法,主要包括PCR,LAMP等,但他们具有一定的局限性,不能满足结核病的快速,准确的检测。电化学DNA传感器作为一种新型的核酸检测手段,具有优异的选择性,高灵敏度,便携性和低成本的特点,具有广阔的实验和临床应用前景。为了进一步考察验证电化学传感器对于结核分枝杆菌检测的潜力,本文构建了基于结核特异性DNA片段的生物传感器,本研究主要包括两个方面:电化学DNA传感器的构建:本部分构建了一种用于检测结核分枝杆菌特异性核酸序列(IS6110)的“三明治夹心型”DNA电传感器。使用具有良好的电化学活性物质聚苯胺-石墨烯(PANI-rGO)纳米复合物作为新的氧化还原纳米探针,用于产生电流响应信号。然后,纳米金胶体颗粒(Au NPs)修饰在PANI-rGO纳米复合材料表面,用于固定信号探针以形成示踪剂标记。在捕获探针,目标DNA,示踪剂标记物上的“三明治”杂交反应之后,可以观察到有区别的检测电流信号。该生物传感器可以在1.0×10-13-1.0×10-8 M的线性范围内,检测结核分枝杆菌特异性的IS6110核酸序列,相关系数为0.9976,最低检测限达到5×10-14 M(S/N=3),实现了对结核分枝杆菌的超灵敏检测。电化学传感器分析临床样本:为了评估该传感器能否用于实际临床检测,我们对临床肺结核病人与非肺结核病人的痰液的PCR产物样本进行分析,发现该方法对于非肺结核病人的痰液标本几乎没有电流响应,而对于肺结核病人的痰液具有高的电流响应,这与PCR的结果一致。证明该方法能够检测临床标本中的结核分枝杆菌,显示出其潜在的临床应用价值。
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