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1.目的本课题是在中医基本原则的指导下,遵循现代循证医学的原则,采用大样本、随机、双盲、双模拟、平行对照、多中心临床试验的研究方法,观察活动期脾虚湿盛型RA患者口服XFC治疗前后临床症状、体征等的变化,客观评价XFC的有效性、安全性。根据XFC治疗前后,RA患者外周血CD4+T淋巴细胞的凋亡率、Fas/FasL细胞凋亡通路中有关凋亡基因蛋白的表达,及与某些临床指标的相关性,探讨XFC治疗RA的作用机制。2.方法活动期RA患者共304例,分别来自四个研究中心风湿科的门诊、住院患者。治疗组口服XFC(3粒/次,tid)+LEF(模拟剂),对照组口服LEF(10mg/次,qn)+XFC(模拟剂)。剔除不符合纳入标准、符合排除标准和未能完成试验的患者共22例,剩下282例均完成临床试验。取得随机号之日,作为治疗及观察的起始日期,连续治疗4周为1个疗程,每例患者均观察3个疗程,及治疗结束4周后随访1次。详细记录患者治疗前及治疗中(第4周,第8周)、第3个疗程结束后(第12周)有关临床症状、体征,实验室指标、生活质量及合并用药、不良事件等。随机选取28例RA患者(来自安徽中医药大学第一附属医院风湿科)作为实验研究对象,选择10例健康者为NC组。应用FCM检测RA患者治疗前、后及NC组CD4+T细胞凋亡率,qRT-PCR检测凋亡基因Fas,FasL,Caspase-3,Caspase-8,bcl-2,bax mRNA的相对表达水平,WB测定凋亡蛋白fas,fasl,Caspase8,Caspase3的表达量。分析RA组CD4+T细胞凋亡率、凋亡基因mRNA的表达水平与临床指标的相关性。3.结果3.1临床研究结果治疗后第4、8、12、16周分别计算ACR20、ACR50、ACR70的数值,xfc组vslef组,p>0.05,2组总体疗效相当。xfc组、lef组治疗后das28-3评分较治疗前均显著降低,p<0.01。两组实验室指标:治疗后,xfc组esr、crp、rf值降低,vs治疗前,p>0.05,ccp明显降低,p<0.01;lef组治疗后esr、rf值明显降低,vs治疗前,aap<0.01,crp值下降,vs治疗前,ap<0.05。治疗后,lef组vsxfc组,p>0.05。xfc组治疗后ccp、dd值明显降低,vs治疗前,aap<0.01,xfc组治疗后tt值下降,vs治疗前,p<0.05。lef组治疗后plt明显降低,vs治疗前,aap<0.01,dd值降低,vs治疗前,ap<0.05,有统计学意义。两组治疗前后中医症状:xfc组治疗后中医症状总分明显降低,vs治疗前,p<0.01;治疗后,lef组vsxfc组,p<0.05,xfc组优于lef组。2组治疗后中医主要症状、中医次要症状分值均明显降低,vs治疗前,p<0.01;治疗后,疲倦乏力、纳食减少,大便稀溏,lef组vsxfc组,p<0.01,xfc组明显优于lef组。2组治疗后,关节晨僵时间、压痛数、肿胀数均明显减少,vs治疗前,p<0.01;关节压痛数治疗后,lef组vsxfc组,p<0.01,xfc组明显优于lef组。关节肿胀数在12周-1周的差值,lef组vsxfc组,p<0.05,xfc组优于lef组。2组治疗后,患者对关节疼痛、疾病整体评分,医师对疾病活动评分均明显下降,vs治疗前,p<0.01。2组治疗前、后关节x线分级比较,p>0.05;治疗后,lef组vsxfc组,p>0.05。2组治疗后,生活之力及精神状况haq、qlt、sds、sas评分均较治疗前明显下降,vs治疗前,p<0.01。sds在治疗后,治疗后与治疗前的差值,lef组vsxfc组,p<0.05,xfc组优于lef组。不良事件(上腹部不适、头发脱落),肝、肾功能,血、便、尿常规,心电图等异常发生率,lef组vsxfc组,p>0.05。3.2实验研究结果cd4+t淋巴细胞凋亡水平,治疗前,xfc组、lef组与nc比较,p<0.001。治疗后,xfc组vslef组,p>0.05,xfc组、lef组各自与治疗前比较,p<0.001。cd4+t细胞凋亡蛋白fas、fasl、caspase8、caspase3、bcl-2、baxmrna相对表达量,治疗前,xfc组、lef组与nc比较,p<0.001;2组治疗后,fas、caspase3、fasl、caspase8、baxmrna相对表达量均较治疗前明显增高,bcl-2mrna相对表达量明显降低,vs治疗前,p<0.001;bcl-2,xfc组vslef组,p<0.001。cd4+t细胞凋亡蛋白表达量(wb法),治疗前,fas、fasl、caspase3,xfc组vsnc,p<0.001,caspase8,p<0.05。xfc组治疗后,fas、caspase3fasl、caspase8的表达量明显升高,vs治疗前,p<0.001。lef组治疗后,fas、caspase8、caspase3表达量明显升高,vs治疗前,p<0.001;fasl表达量升高,vs治疗前,p<0.05。cd4+t细胞凋亡率与esr、rf呈负相关;fas与esr、crp呈负相关;caspase3与esr呈负相关;bcl-2与esr呈明显正相关;bax与关节肿胀数呈明显负相关。结果表明:xfc、lef治疗ra均有疗效。xfc可显著改善ra患者关节压痛数、肿胀数及中医症状积分、疲倦乏力、纳食减少、大便稀溏等。2组不良事件发生情况相当。xfc能够增加ra患者cd4+t细胞凋亡水平,上调fas、fasl、caspase8、caspase3、bax的表达量,下调bcl-2的表达量。某些凋亡蛋白的表达水平与临床主要观察指标esr、rf、关节肿胀数等密切相关。4.结论xfc治疗ra与lef疗效相当。xfc能够显著减少关节压痛数、肿胀数及改善中医症状积分、疲倦乏力、纳食减少、大便稀溏、sds积分等。说明xfc不仅可以治疗ra,还具有整体调节,改善疲倦乏力,食欲不振等症状,缓解患者思想压力,改善精神状态的作用。2组不良事件均为轻、中度。xfc是一种治疗ra的有效药物,有较好的临床疗效。xfc能够增加ra患者cd4+t细胞凋亡水平,上调fas、fasl、caspase8、caspase3、bax的表达,下调bcl-2的表达。某些凋亡蛋白的表达水平与ESR、RF、关节肿胀数等密切相关。推测XFC治疗RA的机制可能在于增加调控Fas/FasL细胞凋亡通路,调节细胞凋亡相关蛋白的表达,促进细胞凋亡。