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目的：了解结肠癌细胞系p55PIK的表达水平,及干预p55PIK的表达对结肠癌细胞的侵袭转移能力的影响。方法：1、用western blot检测了结肠癌细胞系中的p55PIK的表达水平。2、构建p55PIK高表达的载体pcDNA3-p55PIK,通过转染方法转染入HT29及SW480细胞系后,构建两个稳定高表达p55PIK的细胞系。同时构建低表达质粒pLKO1.0-sh-p55PIK并其包装成慢病毒,构建低表达p55PIK的稳定细胞系。3、用单细胞克隆形成实验和BrdU掺入法来检测细胞的克隆形成能力和DNA合成能力的变化。用划痕实验和Transwell实验检测稳定细胞系的运动能力。4、用裸鼠结肠癌细胞肝转移的模型在体内验证p55PIK对结肠癌的转移能力是否有影响。结果：发现结肠癌原位病灶来源的HT29、HCT116及SW480细胞中p55PIK表达极低,腹腔内淋巴结转移病灶来源的SW620稍高,远处转移灶来源的LoVo细胞中p55PIK有明显表达。并且成功构建了高表达p55PIK的细胞系HT29-p55PIK、SW480-p55PIK,及低表达p55PIK的LoVo-si-p55PIK细胞系,同时构建了含空载体的对照细胞,并经western blot验证正确。克隆形成实验中,SW480对照细胞形成克隆的平均直径是945.8±156.8μ m,而高表达组是1348.3±181μ m,明显增高(p=0.0067)；而HT29细胞中,对照组克隆的平均直径是381.7±37μm,高表达组是644.3±148.5μm,也明显比对照增高(p=0.009)。划痕实验发现高表达p55PIK组的SW480细胞的平均迁移距离在12小时是127±6.65μ m,对照细胞组是73.3±28.6u m。24小时高表达组是214±3um,对照组是156±40um。高表达p55PIK组在12小时的时间点是对照细胞组的1.7倍(p=0.03),24小时则是对照的1.46倍(p=0.046)。而在Transwell实验中,SW480对照组48小时的平均200X视野迁移数是162±26个,高表达p55PIK组为371±28个；侵袭实验中,对照组48小时的平均200X视野迁移数是96±30个,高表达组为157±23个,高表达组在迁移和侵袭实验中分别是对照的2.29倍(p=0.009)和1.63倍(p=0.003),迁移和侵袭能力增强；低表达p55PIK的LoVo细胞24小时迁移实验中,低表达p55PIK的LoVo细胞的迁移个数(30±14)明显比对照组(58±7)低,是对照细胞的51.7%(p=0.004)迁移能力降低。在结肠癌肝转移模型中,高表达p55PIK的SW480组细胞有两例发生肉眼可见的肝转移灶,对照组未见肉眼可见的肝转移灶。结论：转移灶来源的结肠癌细胞系的p55PIK表达量较高,且高表达p55PIK可使结肠癌细胞HT29和SW480的运动及侵袭能力增强,还可以使SW480的克隆形成能力增强；而低表达p55PIK后可以使LoVo细胞的运动能力减弱。高表达p55PIK的SW480在裸鼠体内转移到肝脏能力的增强。目的：研究p55PIK影响侵袭转移的机制及针对p55PIK的靶向干预作用。方法：1.利用realtimePCR技术检测p55PIK表达对转移有关的胞内因子或胞外因子的mRNA的影响。2.用Elisa法来检测是否有对应的相关因子蛋白的变化。3.通过荧光报告基因技术和western blot技术分析了可能与p55PIK有关系的,同时也是和转移密切相关的基因NF-κB的激活是否发生了变化。4.用N24靶向干预p55PIK,通过transwell和划痕试验检测其对细胞运动能力的作用。结果：SW480细胞高表达p55PIK后,realtimePCR发现细胞因子PDGF-A的mRNA水平是对照的3.9±2倍(p=0.042),HT29为1.7±0.2倍(p=0.04),TNF-α是的mRNA变化是3.2±0.5倍(SW480,p=0.004)和1.9±0.45倍(HT29,p=0.02),高表达组明显升高。而Elisa结果表明高表达p55PIK可以促进TNFa的表达升高了1.8倍(SW480,p=0.0002和1.75倍(SW480,p=0.003),在蛋白水平上证实了高表达p55PIK促进TNFα的分泌,荧光报告基因系统提示使p55PIK高表达后SW480的NF-κB对下游基因的转录活性是对照组的1.9±0.25倍(p=0.0002),而HT-29细胞中p55PIK高表达后是对照组的1.5±0.2倍(p=0.009)。而使LoVo细胞的p55PIK低表达后,NF-κB的活性对照组的47±5%(p=0.002),明显受到抑制。而且western blot结果证实p65的536位磷酸化水平也同时降低。使用p55PIK靶向干预药物N24后,划痕实验中,空白组、对照肽组(Cp)、N24组在12小时的迁移距离分别为93.7±11μm、75.7±17.5μm和20.7±6.1μm,24小时后的迁移距离为137.7±24.5μm、109±20.9μm和45.3±5.9μm,N24组比空白组明显降低(12小时p=0.0005,24小时p=0.003,n=3),比对照组也明显降低(12小时p=0.0005,24小时p=0.003,n=3)；在Transwell迁移实验中,空白组200倍视野下平均迁移细胞数为205±20个,Cp组为213±15个,N24组为125±45个N24组相对于空白组(p=0.02,n=3)和Cp组(p=0.01,n=3)明显降低,侵袭实验中,空白组200倍视野下平均侵袭细胞数为123±26个,Cp组为102±20个,N24组为604±20个,N24组比对照组(p=0.002)和Cp组(p=0.005)明显下降。结论：p55PIK通过影响NF-κB通路和影响了与转移相关的细胞因子如PDGF-A、TNFα等的变化达到影响细胞运动能力的作用。p55PIK的抑制剂N24具有抗细胞运动的能力。