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免疫细胞生物学和免疫分子生物学的进展,推进了免疫学在肿瘤治疗中的应用。现今,肿瘤免疫治疗已成为肿瘤治疗的基本手段之一。其中细胞介导的过继免疫治疗(Adoptive cellular immunotherapy,ACI)为当前研究的热点之一。过继性细胞免疫治疗是指通过给肿瘤患者输入特异性的或非特异性的具有抑制肿瘤细胞生长的免疫效应细胞,直接杀伤肿瘤细胞或在患者体内诱发机体免疫反应达到抑制和治疗肿瘤的目的。细胞因子诱导的杀伤细胞(Cytokine-induced killer,CIK)是一种新型的免疫杀伤细胞,是ACI研究的热点之一。目前有关肿瘤免疫效应细胞的研究和临床的初步资料提示细胞因子诱导的杀伤细胞是一种新型高效的具有广谱杀瘤活力的MHC非限制性的免疫效应细胞,具有增殖速度快、杀伤活性高、临床应用副作用小等优点,是目前发现的杀瘤活性最强的免疫效应细胞之一,成为肿瘤免疫治疗的热点。本实验收集6名健康献血者和6名肝癌患者鲜血者的新鲜外周血,分别通过常规分离外周血单个核细胞,应用相应细胞因子体外诱导分化出CIK细胞,并动态观察CIK细胞的生物学特性、体外增殖活性、细胞表型和细胞毒活性变化。然后将两种来源的CIK细胞的生物学特性及体内外杀瘤活性进行对比研究。对CIK细胞抗瘤机制做进一步研究,对过继免疫疗法治疗肝癌进行新的探索,为CIK细胞进一步应用于临床提供理论依据。第一部分CIK细胞体外增殖和杀瘤活性研究目的观察源于健康人与肝癌患者CIK细胞细胞形态学、细胞表型、增殖活性及细胞毒活性的变化及对比研究。方法提取6健康供血者和6名肝癌患者的PBMC,通过序列添加IFN-γ、CD3McAb、IL-2、IL-1,进行CIK培养,动态观察两种来源CIK细胞的增殖活性;在流式细胞仪上做动态培养物的表型分析;并用MTT法检测两种来源CIK细胞杀伤SMMC-7721肝癌细胞的活性。结果1.两种来源CIK细胞的增殖性能无明显区别,p＜0.05。CIK细胞具有培养方法简易、扩增迅速,两种来源CIK细胞前后扩增分别达到152.667×10~7、143.500×10~7。2.以SMMC-7721肝癌为靶细胞,在1.25:1-10:1的效靶比范围内,两种来源的CIK细胞的杀伤活性均无明显差异。但对SMMC-7721肝癌细胞杀伤明显。两种来源CIK细胞在效靶比为10:1时对肝癌细胞的杀伤率最高,分别为0.262、0.260。3.两种来源CIK细胞表面分子CD3+CD56+、CD45RA+的变化无明显差异,源于肝癌患者CIK细胞的CD8+的阳性率与源于健康人CIK细胞的CD8+的阳性率有明显差异,前者高于后者;但随着培养时间的延长,两种来源CIK细胞中CD3+CD56+双阳性细胞和CD8+细胞的百分含量逐渐升高,而CD45RA+细胞的百分含量逐渐减少。结论源于健康人CIK细胞与源于肝癌患者CIK细胞的生物学特性、增值活性及细胞毒活性均无明显差异;源于肝癌患者CIK细胞的CD8+阳性率高于健康人来源的CIK细胞CD8+阳性率,CD3+CD56+、CD45RA+的阳性率无明显差异。CIK细胞培养简易、扩增迅速。对肝癌细胞SMMC-7721杀伤率高。具有良好的临床应用前景。第二部分CIK细胞联合化疗的抗肿瘤研究目的观察CIK细胞表型、体外增殖活性和细胞毒活性变化,并探讨CIK细胞对化疗的辅助治疗作用。方法提取健康供血者的PBMC,常规诱导出CIK细胞,动态观察培养物增殖活性和表型变化;并用MTT法测定其体外细胞毒活性;在Balb/c裸鼠皮下接SMMC-7721肝癌细胞,化疗后应CIK细胞进行免疫治疗,分成对照组、单独化疗组和CIK+化疗治疗组,观察CIK细胞对荷瘤鼠的抑瘤作用结果CIK细胞对化疗具有辅助治疗作用,治疗25天后CIK细胞+化疗对肿瘤的抑制作用明显强于单独化疗组。结论CIK细胞是一种强大的免疫活性细胞,对化疗具有辅助治疗作用,具有广阔的应用前景。