蒺藜(Tribulus terrestris L.)为蒺藜科一年生草本植物,其全株、果实、根、茎、叶、花都可入药,被誉为“草中名药”,具有抗炎、抗氧化、抗菌和抗肿瘤等多种药理作用。蒺藜含有皂苷、黄酮和生物碱等多种化学成分,其中主要成分为皂苷类化合物。皂苷类化合物具有抗肿瘤、降糖、抗炎、提高免疫、心血管和神经保护等生物活性。脂多糖(LPS)是革兰氏阴性菌细胞壁中的一种内毒素,可以诱发炎症反应,激活先天性免疫系统,导致肿瘤坏死因子-α(TNF-α)等细胞因子产生,激活Toll样受体通路,并活化下游NF-κB通路,也可通过诱导NO等炎症介质释放,诱发一系列炎症反应。畜禽的很多疾病都与炎症密切相关,对生产实践产生不良影响。目前常用的甾体和非甾体抗炎药物具有一定的副作用。因此,研究和开发一种天然的、绿色的抗炎药物逐渐成为研究热点。本试验以蒺藜叶和蒺藜果实总皂苷为研究对象,考察其提取工艺、化学成分、抗氧化作用和抗炎作用,为兽医临床抗炎药物的研发提供一定的研究思路和方法。本研究采用单因素试验和Box-Behnken响应面试验考察了超声提取总皂苷的最佳条件;采用液相-质谱联用法鉴定了蒺藜叶及果实的主要化学成分;采用ABTS自由基清除能力测定法、DPPH自由基清除能力测定法和铁离子还原能力测定法(FRAP)测定了蒺藜叶与果实总皂苷的体外抗氧化活性;采用LPS诱导的RAW264.7细胞炎症模型和小鼠急性肺损伤模型,采用Griess法检测细胞上清及肺组织匀浆液中NO含量,采用酶联免疫吸附试验检测细胞上清及肺灌洗液中TNF-α含量,采用免疫蛋白印迹法检测炎症信号通路中TLR4、TRAF6、IκB及P-IκB蛋白水平变化,较为系统全面地评价了蒺藜叶总皂苷地抗炎活性,并进一步揭示了其作用机制。本研究通过单因素试验和响应面试验确定了蒺藜叶总皂苷的最佳提取工艺为:乙醇浓度30%,提取时间55 min,液料比35:1(m L/g),超声温度46℃,该条件下测定的蒺藜叶总皂苷含量为5.52%;确定的蒺藜果实总皂苷最佳提取工艺为:乙醇浓度100%,提取时间40 min,液料比25:1(m L/g),超声温度70℃,该条件下测定的蒺藜叶总皂苷含量为2.94%。抗氧化试验结果表明,蒺藜叶和果实粗皂苷均具有一定的ABTS、DPPH自由基清除能力和FRAP还原能力。体外抗炎试验结果表明,蒺藜叶和果实总皂苷均能极显著降低细胞因子(TNF-α)和炎症介质(NO)的含量,直接发挥抗炎保护作用;体内外抗炎试验均表明蒺藜叶总皂苷能极显著降低TLR4、TRAF6蛋白水平,能极显著抑制IκB磷酸化,进一步揭示了其通过抑制TLR4-NF-κB信号通路发挥抗炎作用。综上所述,本研究成功优化出了蒺藜叶和果实总皂苷的最佳提取工艺,并鉴定了其主要成分;较为全面的评价了蒺藜叶和果实总皂苷的抗氧化作用和抗炎作用;并通过体内外炎症模型,进一步揭示了蒺藜叶总皂苷通过抑制TLR4-NF-κB信号通路发挥抗炎作用,为兽医临床抗炎中药的研究和开发提供了理论依据。