环状RNA hsa_circ_0000326对脑胶质瘤恶性生物学功能的调控作用及临床意义研究

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目的:探究环状RNA(circular RNA,circ RNA)hsa_circ_0000326对脑胶质瘤生物学功能的影响及其临床意义。方法:首先,利用GEO数据库中胶质瘤相关的circ RNA芯片数据(GSE146463),进行差异分析,筛选差异表达的circ RNA。进一步,通过实时定量逆转录聚合酶链式反应(Real-Time Quantitative Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction,q RT-PCR)技术,检测38例脑胶质瘤患者的肿瘤组织和16例脑外伤患者脑组织中hsa_circ_0000326的表达情况。同时,收集胶质瘤患者的临床资料,采用Fisher’s精确检验、Kaplan-Meier法和COX风险回归模型,分析hsa_circ_0000326表达与患者临床预后的关系,探究其临床意义。其次,构建hsa_circ_0000326敲低慢病毒,转染胶质瘤细胞系U251和U87,通过抗性筛选,建立稳定敲低hsa_circ_0000326的胶质瘤细胞细胞系。采用细胞增殖计数(Cell Counting Kit-8,CCK-8)、细胞克隆形成、细胞划痕愈合、Transwell小室侵袭迁移、流式细胞仪、吖啶橙(acridine orange,AO)染色和蛋白质印迹分析(Western Blot Analysis,WB)等检测方法,探究hsa_circ_0000326对胶质瘤细胞生物学功能的影响。最后,利用在线数据库和Cytoscape软件,初步预测并构建circ RNA-mi RNA-m RNA调控网络。结果:qRT-PCR结果显示,与正常脑组织相比,hsa_circ_0000326在胶质瘤组织中表达显著升高,且与肿瘤级别相关。Kaplan-Meier生存曲线显示hsa_circ_0000326高表达患者的总生存期相对较短。COX回归分析表明,hsa_circ_0000326高表达(HR=5.462,95%CI(1.077-27.691),P=0.040)是影响胶质瘤患者预后的危险因素。细胞功能实验发现,下调hsa_circ_0000326的表达可抑制U251、U87细胞的增殖、侵袭、迁移和自噬,同时可促进细胞凋亡。结论:Hsa_circ_0000326在脑胶质瘤组织中表达上调,促进胶质瘤细胞增殖、侵袭、迁移和自噬,同时抑制细胞凋亡。Hsa_circ_0000326高表达与胶质瘤患者不良预后相关,其可能作为胶质瘤的临床治疗的生物标志物和潜在靶点。Hsa_circ_0000326可能作为竞争性内源RNA调控胶质瘤的发生发展。
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