拟南芥DDB1A基因在ABA信号转导途径中的功能分析

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DDB1与CUL4相互作用形成E3泛素连接酶复合体在DNA修复、DNA损伤和对植物器官发育,花期调控以及光形态建成等发育过程起调控作用。ABA是调节植物生长发育和响应生物或非生物胁迫的重要激素,明确ABA信号转导通路的分子机制对促进现代农业生产发展具有重大的意义。本研究利用Infusion技术成功地克隆了DDB1A,将其构建到植物表达载体pEGAD上,通过农杆菌介导的蘸花侵染的方法将其转化到拟南芥中,利用Basta抗性筛选和Luminometer仪器瞬时检测,得到DDB1A的过表达转基因植株,最终得到T3代转基因植株。利用western blot对DDB1A的T3代转基因植株进行检测,证明DDB1A已整合到拟南芥基因组中,并成功表达。利用三引物法将ddb1a突变体进行纯合鉴定,鉴定出SALK038757C是纯合的突变体。DDB1A(gene locus AT4G05420)是一种损伤DNA结合的蛋白,它能够与CUL4-RING泛素连接酶形成一个复合体,它参与植物激素信号转导的过程,在本实验中DDB1A是响应ABA的基因。表型分析表明, DDB1A对ABA敏感,突变体ddb1a对ABA不敏感,说明DDB1A是响应ABA的基因,启动子序列分析显示,在DDB1A启动子区有一个响应ABA的元件,利用实时荧光定量PCR技术,分析了DDB1A基因在不同生育期的表达特性和ABA诱导的表达模式。结果表明,DDB1A在各个组织都有表达,在花中的表达量最多,分析可能参与花器官的发育,并且在转录水平上响应ABA。
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