论文部分内容阅读
目的:获得纯度较高的巴戟天低聚糖部位,研究其对去卵巢致骨质疏松模型大鼠的影响,阐明其抗骨质疏松作用机制。方法:结合课题组前期研究基础,以一定浓度乙醇为溶剂,采用热回流提取得到巴戟天低聚糖粗提物,以活性炭、D-900离子交换树脂等脱色纯化,以不同比例两相溶剂,采用重结晶法纯化得到较高纯度的巴戟天低聚糖;采用果糖-浓盐酸显色法、高效液相色谱-蒸发光散射检测法评价巴戟天低聚糖的提取纯化效果。72只SD雌性大鼠分为九组:空白组(KB)、假手术组(JS)、模型组(MX)、阳性药对照组(YD)、巴戟天低聚糖低剂量组(DD)、巴戟天低聚糖中剂量组(DZ)、巴戟天低聚糖高剂量组(DG)、巴戟甲素组(BJ)、巴戟天提取液组(BT)。除KB组与JS组外,其它组均施双侧卵巢切除(OVX)手术,JS组切除卵巢附近同等大小脂肪,KB组不做任何处理。于手术后8周开始灌胃给药,每日一次,KB组、JS组、模型组给予生理盐水,YD组给予阿仑膦酸钠0.1mg/100g(每一百克体重,下同),DD组、DZ组、DG组分别给予巴戟天低聚糖10 mg/100g、40 mg/100g、100 mg/100g,BJ组给予巴戟甲素5 mg/100g,BT组给予巴戟天水提液100 mg/100g。实验过程中对大鼠体重进行监测,连续给药8周后将大鼠处死,计算各脏器湿重,测定各组大鼠右侧胫骨骨密度,尿中钙(Ca)、肌酐(Cr)、羟脯氨酸(HOP)和Ⅰ型胶原N末端肽(NTX)浓度及血清中碱性磷酸酶(AKP)、抗酒石酸酸性磷酸酶(StrACP)活力和骨钙素(BGP)、Ⅰ型胶原N端前肽(PINP)、骨保护素(OPG)、核因子κB受体活化因子配基(RANKL)浓度,并进行统计分析。结果:巴戟天低聚糖提取纯化工艺:通过上述方法提取、纯化,获得了纯度较高的巴戟天低聚糖,经扩大实验验证,提取纯化后蔗糖、蔗果三糖、蔗果四糖、蔗果五糖、巴戟甲素含量之和达50%,其中总低聚糖含量达90%以上。抗骨质疏松药效学实验结果显示:大鼠卵巢切除后骨密度会降低,巴戟天低聚糖对卵巢切除致骨质疏松模型大鼠骨密度的下降有缓解作用,且作用强度随着剂量的增加而增强;巴戟天低聚糖高剂量组几乎能将大鼠骨密度维持在正常水平。与模型组大鼠相比,巴戟天低聚糖高剂量组(DG)能显著提高尿中羟脯氨酸(HOP)浓度(p<0.01)和血清中骨保护素(OPG)浓度(p<0.01),降低血清中核因子κB受体活化因子配基(RANKL)浓度(p<0.05)和Ⅰ型胶原N端前肽(PINP)浓度(p<0.05),中剂量组(DZ)组能提高血清中骨保护素(OPG)浓度(p<0.05),降低血清中Ⅰ型胶原N端前肽(PINP)浓度(p<0.01),低剂量组(DD)能降低血清中骨钙素(BGP)浓度(p<0.05),提高尿中Ⅰ型胶原N末端肽(NTX)浓度(p<0.01)。结论:经40%醇提,活性炭和D-900离子交换树脂纯化处理后,可得纯度较高的巴戟天低聚糖,此工艺稳定可靠。所得巴戟天低聚糖对大鼠卵巢切除致骨质疏松具有防治作用,其通过提高血清中骨保护素(OPG)浓度,竞争性结合于核因子κB受体活化因子配基(RANKL),并且降低血清中RANKL浓度,从而抑制RANK与RANKL结合活性,最终抑制破骨细胞的生成,延缓骨量的降低,巴戟天低聚糖抗骨质疏松的主要作用机制,可能在于能改善 OPG/RANK/RANKL 通路。