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作为肿瘤免疫治疗的“中心法则”细胞,肿瘤浸润CD8+T细胞的分化及效应功能是由细胞免疫介导的抗肿瘤免疫应答的决定因素。肿瘤抗原刺激初始型CD8+T细胞（Na（?）ve CD8+T cells,TN）活化,分化为细胞毒性 T 淋巴细胞（Cytotoxic T lymphocytes,CTLs）迁入肿瘤组织,杀伤肿瘤细胞,小部分效应细胞转化为记忆细胞,中枢记忆T细胞（CentralmemoryT cells,TCM）参与外周循环,组织原位记忆T细胞（Resident memoryT cells,TRM）则驻留于组织,发挥局部抗肿瘤免疫效应。然而,在肿瘤微环境（Tumor microenvironment,TME）中抗原持续刺激下,CD8+T细胞发生耗竭,分泌效应分子、细胞毒性分子能力减弱,并高表达多种免疫检查点受体（Immune checkpointreceptors,ICRs）,无法彻底清除肿瘤。因此,寻找合适的治疗策略,增强肿瘤浸润CD8+T细胞效应功能,同时抑制其向耗竭状态发展是目前肿瘤免疫治疗研究热点之一。Eomesodermin（Eomes）是与T-bet高度同源的T-box家族转录因子,既往研究将Eomes定义为CD8+T细胞效应功能的“调节剂”,并可促进中枢记忆T细胞形成。此外,在慢性病毒感染性疾病及肿瘤中,Eomes高表达与CD8+T细胞耗竭密切相关,敲除T细胞中Eomes的一条等位基因可以下调耗竭型CD8+T细胞比例,有效控制肿瘤生长。基于本课题组前期结果,Eomes缺失可进一步增强细胞因子IL-33介导的抗肿瘤免疫应答,延长荷瘤小鼠生存时间,本文借助条件性敲除Eomes的小鼠模型（EKO小鼠）,建立 WT-B16、EKO-B16、WT-B16-IL-33、EKO-B16-IL-33 荷瘤小鼠模型,分析转录因子Eomes缺失抑制B16、B16-IL-33肿瘤生长的潜在机制,并探讨了转录因子Eomes应用于肿瘤免疫治疗的可行策略。[目的]探讨Eomes缺失增强IL-33介导的抗肿瘤免疫效应的潜在机制。[方法]建立 WT-B16、EKO-B16、WT-B16-IL-33、EKO-B16-IL-33 荷瘤小鼠模型,观察、比较不同组别荷瘤小鼠肿瘤生长及小鼠生存情况;经免疫荧光标记和流式细胞术,分析肿瘤接种第14天、第39天荷瘤小鼠肿瘤浸润T细胞表型及效应功能;经Tc0、Tc0+TGF-β、Tc1、Tc1+IL-33等不同分化条件体外培养WT、EKO小鼠脾脏来源CD8+T细胞,检测CD103、IFN-γ表达;经QPCR检测肿瘤组织Eomes、IFN-γ、perforin、granzyme B、CD103、CD69、TCF1、TGF-β、CTLA-4、PD-1、Tim-3、Lag-3、TIGIT mRNA表达水平;借助TCGA数据库,分析人类皮肤黑色素瘤、肺腺癌、肺鳞癌、结直肠癌组织中Eomes与CTLA-4、PD-1、Tim-3、Lag-3、TIGIT等耗竭相关分子表达相关性;运用R studio对非小细胞肺癌、结直肠癌T细胞单细胞测序结果进行降维处理,展示Eomes与多种耗竭相关分子共表达情况。[结果]1.Eomes缺失进一步增强IL-33抑制B16肿瘤生长的效应,延长荷瘤小鼠生存时间。2.Eomes缺失协同IL-33增强抗肿瘤免疫记忆。3.Eomes缺失或IL-33均可减少荷瘤小鼠脾脏中TCM的形成。4.Eomes缺失联合IL-33上调肿瘤微环境中CD103+CD8+T、IFN-γ+CD103+CD8+T细胞比例。5.Eomes缺失联合IL-33促进IFN-γ+CD103+CD8+T细胞形成。6.Eomes缺失抑制IL-33诱导的T细胞耗竭。7.Eomes缺失持续上调肿瘤浸润CD103+CD8+T、IFN-γ+CD103+CD8+T细胞比例,抑制PD-1+Tim-3+T细胞形成。8.Eomes缺失协同IL-33调控肿瘤微环境效应分子、记忆相关分子及耗竭相关分子表达。9.Eomes主要表达于肿瘤浸润CD8+T细胞,与耗竭分子表达呈正相关,与CD103表达相互排斥。[结论]Eomes缺失通过协同IL-33上调肿瘤浸润TRM比例、增强其效应功能,同时抑制IL-33诱导的CD8+T细胞终末分化,下调耗竭型T细胞比例,从而维持CD8+T细胞长效抗肿瘤效应,进一步增强IL-33介导的抗肿瘤免疫应答。