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湖羊是世界上著名的多羔绵羊品种之一,具有繁殖力高、四季发情、性成熟早、产羔多、耐湿热、耐粗饲、宜舍饲等优良性状。深入开展我国湖羊多胎分子机理的研究,以开发利用湖羊的多胎资源,这对于培育高产品种,改良现有低产品种和多样性保护都具有重要意义。本文主要采用RT-PCR和实时荧光定量PCR技术对湖羊Cox2、Has2、Tsg6和Ptx3基因mRNA在组织的表达,及其在卵巢组织的表达水平进行分析,结果如下:1.湖羊卵巢组织中Cox2基因mRNA表达水平研究本实验根据牛Cox2基因序列(GenBank登录号为NC 005971)设计引物,并以湖羊卵巢组织RNA为模板,PCR扩增,产物为249bp;通过RT-PCR检测Cox2基因在湖羊下丘脑、垂体、卵巢、输卵管、子宫、心肝、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏和肌肉等组织中的表达情况,结果显示该基因在各组织中都有表达。通过荧光定量PCR检测湖羊低产组和高产组卵巢组织中Cox2基因的表达水平,结果显示:Cox2基因在湖羊低产组卵巢组织中的表达水平低于其在高产组卵巢组织中的表达水平,但两者差异不显著(P>0.05)。说明Cox2基因mRNA表达水平与湖羊繁殖性能可能没有直接关系。2.湖羊卵巢组织中Has2基因mRNA表达水平研究本实验根据牛Has2基因序列(GenBank登录号为NC 007312)设计引物,并以湖羊卵巢组织RNA为模板,PCR扩增,产物为158bp;通过RT-PCR检测Has2基因在湖羊下丘脑、垂体、卵巢、输卵管、子宫、心肝、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏和肌肉等组织中的表达情况,结果显示该基因在各组织中都有表达。通过荧光定量PCR检测湖羊低产组和高产组卵巢组织中Has2基因的表达水平,结果显示:Has2基因在湖羊低产组卵巢组织中的表达水平高于其在高产组卵巢组织中的表达水平,两者差异极显著(P<O.01)。说明Has2基因mRNA表达水平与湖羊繁殖性能有一定的关系。3.湖羊卵巢组织中Tsg6基因mRNA表达水平研究本实验根据牛Tsg6基因序列(GenBank登录号为NC009161)设计引物,并以湖羊卵巢组织RNA为模板,PCR扩增,产物为197bp;通过RT-PCR检测Tsg6基因在湖羊下丘脑、垂体、卵巢、输卵管、子宫、心肝、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏和肌肉等组织中的表达情况,结果显示该基因只在湖羊下丘脑、卵巢、子宫和心脏组织中表达,在其他组织中均未检测到表达;通过荧光定量PCR检测湖羊低产组和高产组卵巢组织中Tsg6基因的表达水平,结果显示:Tsg6基因在湖羊低产组卵巢组织中的表达水平低于其在高产组卵巢组织中的表达水平,两者差异极显著(P<0.01)。说明Tsg6基因mRNA表达水平与湖羊繁殖性能有一定的关系。4.湖羊卵巢组织中Ptx3基因mRNA表达水平研究本实验根据牛Ptx3基因序列(GenBank登录号为NC 007299)设计引物,并以湖羊卵巢组织RNA为模板,PCR扩增,产物为279bp;通过RT-PCR检测Ptx3基因在湖羊下丘脑、垂体、卵巢、输卵管、子宫、心肝、肝脏、脾脏、肺脏、’肾脏和肌肉等组织中的表达情况,结果显示该基因下丘脑、垂体、卵巢、输卵管、子宫、心脏、肝脏、肾脏和肌肉组织中表达,在脾脏和肺脏组织中均未检测到表达;通过荧光定量PCR检测湖羊低产组和高产组卵巢组织中Ptx3基因的表达水平,结果显示:Ptx3基因在湖羊低产组卵巢组织中的表达水平低于其在高产组卵巢组织中的表达水平,两者差异极显著(P<0.01)。说明Ptx3基因mRNA表达水平与湖羊繁殖性能有一定的关系。