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蝙蝠是在数量上仅次于啮齿类的第二大哺乳动物,约超过了930种,除在极地等个别地区外广泛分布世界各地。由于其独特的生物学和生态学特点,使蝙蝠成为许多重要新发的或是再发疾病病原体的天然宿主库。已证实蝙蝠为狂犬病病毒和狂犬病相关病毒的重要贮存宿主。
狂犬病是由狂犬病毒(RABV)引起的一种人兽共患自然疫原性传染病,死亡率几乎为100%。对我国狂犬病高发区蝙蝠开展RABV的病原生态学的研究,对阐明我国蝠源RABV的分布及遗传衍化关系具有重要意义,有助于预警和防控狂犬病的发生和流行,都有着重要的公共卫生意义。
狂犬病流行病学研究方法需要制定合理有效的调查程序,包括样品的采集、背景资料的收集整理、研究方法的选择和研究结果的分析。为获得我国蝙蝠狂犬病的流行病学研究资料,将狂犬病高发区广东省的6个地区确定为本次调查采样的地区。本研究共采集2个科3个蝙蝠品种1338只体表健康蝙蝠进行调查。在样品的采集过程中建立了详细的样品登记,详实的记录了全部样品相关流行病学信息,并建立了档案。
通过对所收/采集到的蝙蝠脑组织应用嵌套式nested RT-PCR方法从核酸水平进行的病原学检测,我们完成了5个地区673只蝙蝠的检测,并获得蝠源RABV14条部分N基因序列。检测结果证实,广东地区蝙蝠RABV感染阳性率为2.08%(14/673)。同时我们对检测到的阳性样品进行了直接免疫荧光(FAT)试验和乳鼠脑内接种试验(MIT),试图发现和分离到蝠源的RABV,但均未能获得成功。
参考GeneBank收集的我国及世界范围RABV流行毒株、固定毒株及RRV的基因序列,对本次调查的蝠源RABV序列进行系统发生分析。结果表明,本次调查我国广东蝠源RABV的核酸水平最低同源性达82.6%,氨基酸水平最低同源性为91.8%。系统发生分析表明,这些毒株归属为三个进化群:I、II、III,群内同源关系较近。结合参考序列数据,证明我国RABV均为基因I型,可以划分为5个群,蝠源RABV在A群和D群分布。世界RABV流行株地地域分群明显,中国流行株在其中表现出地域与进化程度上的保守性。我国蝙蝠RABV毒株明显区别于国外蝙蝠RABV毒株,在基因I型内自成体系,与国外蝙蝠毒株无交叉,亲缘关系远。
本次以广东蝙蝠进行的RABV病原生态学研究,获得了蝠源RABV的分子流行病学证据,建立了蝠源RABV毒株流行病学信息数据库,为追踪病毒的传播来源和疫情预警提供依据。