蜡梅[Chimonanthus praecox（L.）Link]是蜡梅科蜡梅属落叶灌木或小乔木,为我国特有品种,因其冬季开花、香味独特、花形美丽,广泛地被应用于盆景制作、切花生产、道路绿化、生物制药等。蜡梅具有较强的非生物胁迫抗性,然而对蜡梅的抗逆分子机制研究仍然比较有限。NAC（NAM、ATAFs、CUC）作为植物中特有的最大的转录因子家族之一,其在植物整个生长发育过程、响应生物及非生物胁迫中都具有重要的调控作用。目前现有关于NAC参与抗逆响应分子机理的研究报道主要集中在模式植物和农作物。为了丰富对蜡梅NAC基因家族生物学功能的认识,本研究克隆了蜡梅CpNAC68基因,描述了其分子特性、亚细胞定位、转录活性、在蜡梅幼苗中的表达等基本特性,通过在拟南芥中过表达分析了过表达植株的非生物胁迫耐性,为进一步解析蜡梅抗逆分子机理提供新的理论基础。具体研究结果如下:1.CpNAC68的克隆及分子特性通过本研究室原有的蜡梅转录组数据库,用PCR技术克隆得到具有完整最大开放阅读框的CpNAC68的cDNA。CpNAC68 cDNA全长为1336 bp,ORF为906bp,编码302个氨基酸。通过同源比对发现CpNAC68蛋白与其他植物的NAC68蛋白有较高相似性,N端具有保守结构域,包含了A、B、C、D、E五个亚域,C端高度变异。通过在线软件预测,CpNAC68是稳定的亲水蛋白,不具有信号肽和跨膜结构域。CpNAC68属于NAM亚家族,与荷花（Nelumbo nucifera）的亲缘关系较近。2.蜡梅CpNAC68亚细胞定位分析与转录活性验证构建亚细胞定位载体p CAMBIA300-CpNAC68-GFP,转化农杆菌,侵染烟草表皮细胞,在荧光共聚焦显微镜下观察到CpNAC68-GFP仅在细胞核中表达,说明CpNAC68定位于细胞核中。构建酵母表达载体p GBKT7-CpNAC68-ORF,将空载体p GBKT7作为阴性对照,p GBKT7-VP16作为阳性对照,在酵母菌株Y2H-Gold中表达,实验结果表明CpNAC68具有转录激活功能。3.CpNAC68在蜡梅幼苗中的表达分析利用qRT-PCR对CpNAC68在蜡梅幼苗的不同组织、不同花期的全花、盛花期的不同花组织部位、不同非胁迫,包括高温（42℃）、低温（4℃）、高盐（300mmol Na Cl）、高渗透压（PEG渗透胁迫）和激素处理（JA、GA、SA）进行表达特性分析。实验结果显示CpNAC68在蜡梅的各个组织、各个花期、花的各组织部位中都有不同程度的表达,其中在老叶中的表达量最高;盛开期和衰败期的表达量高于其他开花时期;盛花期的雌蕊表达量显著高于其他花部位。由此推测该基因可能参与了叶和花的衰老过程;还可能参与调控蜡梅雌蕊的发育。CpNAC68在高温、低温、高盐、JA、GA处理都上调表达,而在高渗透压及SA处理下调表达。因此,CpNAC68可能受多种环境及激素诱导的复杂调控。4.转基因拟南芥的表型及非生物胁迫研究构建植物超表达载体pGWB551-CpNAC68,通过农杆菌介导的花序侵染法将基因转入拟南芥,用潮霉素（Hyg）筛选获得转基因植株。利用q RT-PCR,从T3代纯和植株中选出高、中、低三个不同程度表达量的株系,并进行表型观察及非生物胁迫处理。结果显示,将蜡梅CpNAC68转入Col-0型拟南芥,不会影响植株的生长发育;在干旱、高渗透压、高温、高盐胁迫下,转基因拟南芥的存活率和叶绿素SPAD值都显著高于野生型,相对电导率和丙二醛浓度都显著低于野生型;转基因植株表现出比野生型更强的综合抗逆性。由此说明CpNAC68参与了植株应答多种胁迫的过程,使转基因拟南芥的逆境抗性增强。