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根结线虫(Meloidogyne spp.)是一类重要的病原物,其种类多、寄主范围广、个体微小、分布广泛。近年来,我国设施蔬菜种植面积迅速扩大,复种指数增加,导致根结线虫病害日益严重,严重影响农作物的产量与品质。然而,邯郸市设施蔬菜根结线虫的发生情况、种类、毒性变异情况尚不清楚。因此,及时调查清楚该地区根结线虫发生情况,准确、可靠地鉴定出该地区根结线虫的发生种类和毒性变异情况,对该病害的防治至关重要。1.邯郸市设施蔬菜根结线虫发生分布和为害情况调查本研究选取设施蔬菜种植面积较大的曲周县、馆陶县、鸡泽县、永年区、肥乡区和丛台区等6个县(区)的22个乡镇作为调查点,共采集235个样品。结果显示,曲周县第四疃镇根结线虫发病率最低,为33.3%,肥乡区辛安镇镇和毛演堡乡发病率最高,为60%;第四疃镇病情指数最低,为13.9,毛演堡乡病情指数最高,为41.7,肥乡区发病率和病情指数均高于其他地区。初步明确邯郸市设施蔬菜根结线虫的发生分布和为害情况。2.邯郸市设施蔬菜根结线虫种类的鉴定及优势种群的确定选取具代表性的22个样点进行种类鉴定和优势种群的确定。对二龄幼虫的形态测计和雌虫的会阴花纹进行形态学鉴定。结果显示,二龄幼虫的体长为389(360～430)μm,口针长11.5(11.0～12.3)μm,尾长51.7(50～53)μm;雌虫会阴花纹背弓高,似方形,侧线清晰,线纹粗到细,清楚。这些结果与已报道南方根结线虫形态特征相似度最高。采用分子生物学技术手段对形态特征进一步印证。采用通用引物扩增样品的r DNA-ITS序列获得片段大小约为480 bp,回收纯化PCR产物进行测序,blast比对结果显示,与已提交的南方根结线虫序列相似度高达98%,初步判定邯郸市设施蔬菜根结线虫发生种类为南方根结线虫。利用ITS序列构建系统发育树,结果显示与Gen Bank中已有的南方根结线虫、花生根结线虫和爪哇根结线虫聚类在一个大的分支上,亲缘关系较近。为准确鉴定根结线虫种类,利用5种根结线虫特异性引物分别对供试根结线虫样品进行PCR扩增,只有引物MIF/MI-R有目的条带,大小约为951 bp。结合形态学与分子生物学鉴定结果表明,调查样品全部为南方根结线虫。因此,邯郸市设施蔬菜根结线虫发生种类为南方根结线虫,而且为邯郸市根结线虫的优势种群。3.邯郸市设施蔬菜根结线虫群体的纯化及毒性测定随机从采集到的样品中分离纯化12个南方根结线虫群体,分别接种在感病番茄Sufen2003上培养,分离卵块并在无菌水中孵化制成二龄幼虫(J2)悬液,分别接种在抗病番茄(Lycopersicon esculentum cv.Nemax)上,每株2000条,45 d后逐级记录根结线虫发病程度。试验结果显示,12个群体都存在不同程度的毒性分化现象。抗病番茄对鸡泽县鸡泽镇北安上村南方根结线虫群体等8个群体表现为高抗,根结指数从0.6～1.0不等,对肥乡区辛安镇镇后贾庄等4个群体表现为抗性,根结指数从1.2～1.6不等。试验结果表明,抗性番茄对南方根结线虫不同群体的抗性程度并不一致,不同的南方根结线虫群体对抗性番茄的致病力也不是完全一致的。本研究初步明确了邯郸市根结线虫的种类、分布和毒性变异情况,为邯郸市根结线虫的综合防治和抗性品种布局提供了重要的理论依据。