小球隐孢子虫病毒的鉴定及其特性研究

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本研究通过核酸序列分析、依赖RNA的RNA聚合酶活性测定、生化特性分析和电镜观察等技术方法,首次在我国小球隐孢子虫体内发现存在dsRNA病毒。试验依据Nikolia(1997)发表的小球隐孢子虫dsRNA病毒的核酸序列设计并合成两套引物,分别对小球隐孢子虫(C.parvum)、鼠隐孢子虫(C.muris)、贝氏隐孢子虫(C.baileyi)和火鸡隐孢子虫(C.meleagridis)进行RT-PCR筛选含病毒虫株,结果仅在小球隐孢子虫中扩增出大小约1.6kb(L-dsRNA)和1.1kb(S-dsRNA)目的片段,扩增产物经克隆和测序,并分别与Nikolia报道的序列进行同源性比较,发现与L-dsRNA的同源性为96%,与S-dsRNA同源性为98%。采用[32P]-UTP掺入法对小球隐孢子虫dsRNA病毒的RDRP活性测定,结果发现在50℃时产生多种分子量不同的产物,同时发现该酶活性对依赖DNA的RNA聚合酶抑制剂不敏感,病毒复制为不对称复制。RNaseA和DNaseⅠ敏感性试验的结果表明该病毒核酸对低浓度的RNase(0.01~1μg/ml)和DNase不敏感,但当RNase浓度升高至10μg/ml时该病毒核酸可被降解,此稳定性与反应液的离子强度有关。此外,电镜观察未能在小球隐孢子虫卵囊破碎液中发现病毒样颗粒,这一点与Nikolia(1997)报道的相一致。小球隐孢子虫dsRNA病毒的发现为进一步研究我国隐孢子虫病的诊断、防治以及隐孢子虫的分子生物学等奠定良好基础。
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